組蛋白去乙酰化酶抑制劑對燙傷休克大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞活化和通透性的影響.pdf

1、目的：1.觀察組蛋白去乙?；敢种苿℉DACI）對大鼠50％TBSA Ⅲ°燙傷休克模型肺微血管內(nèi)皮細胞（PMEC）活化和通透性的影響；2.研究HDACI對體外TNF-α刺激PMEC活化和通透性的影響及其機制，為其用于致死性燙傷休克的早期救治提供實驗依據(jù)。
　　 方法：1.動物模型雄性SD大鼠，麻醉后隨機分為①假燙組，水浴溫度37℃15s；②燙傷組，水溫80℃，背部和雙下肢15 s、腹部8 s，造成50％TBSAⅢ°燙傷；③HD

2、ACI組，分別于燙傷后即刻皮下注射兩種HDACI，丙戊酸鈉（VPA）和2-甲基-2-戊烯酸（2M2P）（300mg/kg體重，100mg/ml）.各組大鼠分別于燙傷后2h、6h及12h，采用伊文斯藍（EB）染色法檢測肺血管通透性；腹主動脈取血檢測HCT和臟器功能指標；取肺組織，干濕重法檢測肺組織含水率，免疫組化法檢測VEGF、E-selectin和ICAM-1表達；TUNEL法檢測肺血管內(nèi)皮細胞凋亡率。2.細胞培養(yǎng)雄性SD大鼠采用組織塊

3、法獲得肺微血管內(nèi)皮細胞（PMECs）。在24孔Transwell小室中建立單層PMEC細胞進行通透性試驗，分為①對照組、②TNF-α組、③VPA組和④2M2P組。②③④組細胞加入TNF-α刺激（終濃度500ng/ml），⑦④組再分別加入VPA和2M2P（0.05mg/ml）。置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱6h后，在頂層小室中加入牛血清白蛋白（0.5mg/ml）。45min后在頂層小室和孔內(nèi)各取樣100μl，BCA法檢測蛋白濃度，計算通透系

4、數(shù)。另在24孔板中每孔加入106細胞，分組及處理同上。孵育6h后取上清液，采用ELISA法檢測VEGF、sICAM-1、sE-selectin、和HSP70，裂解細胞提取核蛋白檢測NF-κB濃度，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率。
　　 結(jié)果： 1.建立了50％TBSAⅢ°燙傷休克大鼠模型 通過貼紙法確定50％TBSA燙傷面積，取燙傷部位組織病理檢查確認達到Ⅲ°燙傷，燙傷組6h和12h死亡率分別為80％和100％。動物的臨床表現(xiàn)、平均動

5、脈壓和臟器功能顯示大鼠發(fā)生致死性燙傷休克。2.HDACI對燙傷休克大鼠模型肺血管通透性的影響與燙傷組相比，傷后2h和6h VPA組和2M2P組HCT和肺組織含水率降低，肺血管對EB的通透性降低（p均<0.05），肺水腫等病理改變減輕；VPA組作用顯著強于2M2P組（p<0.05）。3.HDACI對燙傷大鼠模型內(nèi)皮細胞活化和凋亡的影響燙傷后2h和6h，燙傷組肺微血管內(nèi)皮細胞VEGF、E-selectin、IChM-1表達及凋亡率均較假燙組

6、顯著升高；VPA組2h和6h各細胞因子陽性表達率和凋亡率均顯著低于燙傷組（p均<0.05）；2M2P組2h和6h各細胞因子陽性表達率與燙傷組無顯著差異（p均>0.05），凋亡率顯著低于燙傷組（p<0.05）。4.成功通過組織塊法獲得了穩(wěn)定的大鼠PMEC，并對其進行了形態(tài)學(xué)和熒光免疫學(xué)鑒定。5.HDACI對TNF-αz刺激PMEC單層細胞通透性的影響TNF-α刺激6h后，PMEC對牛血清白蛋白的通透系數(shù)Pa[×10-5ml/（min*cm

7、2）]較對照組顯著升高（435.10±36.87 Vs.72.54±11.38，p<0.05）。VPA組和2M2P組Pa顯著低于TNF-α組，VPA的作用明顯強于2M2P（276.55±30.18Vs.324.68±26.48，p<0.05）。6.HDACI對TNF-α刺激PMEC釋放細胞因子的影響TNF-α刺激后，VEGF、sE-selectin和sOCAbt-1表達均較對照組顯著增加，VPA組上述因子水平顯著低于TNF-α組（p均<

8、0.05）；2M2P組與TNF-α組無顯著差異（p<0.05）。7.HDACI對TNF-α刺激PMEC后NF-κB p65表達的影響VPA能顯著抑制TNF-α刺激引起的細胞核內(nèi)NF-κB p65表達增加（872.31.55±133.48 Vs.1637.84.68±215.64 pg/ml，p<0.05），而2M2P此作用不明顯。8.HDACI對TNF-α刺激PMEC后HSP70和凋亡率的影響與對照組相比，TNF-α刺激后PMEC表達H

9、SP70增加（97.54±7.64Vs.25.14±4.38，p<0.05），凋亡率升高（21.24±3.10％Vs.2.31±0.42％，p<0.05）；VPA和2M2P能促進HSP70表達（177.88±19.85和126.35±14.89pg/ml），降低PMEC凋亡率（12.26±1.9％和16.42±2.6％），VPA作用明顯強于2M2P（p<0.05）。
　　 結(jié)論：大鼠50％TBSAⅢ°燙傷休克模型和體外PMEC細