防治甜瓜枯萎病木霉菌REMI變異株篩選及生物安全性評價.pdf

1、利用REMI技術(shù)進行木霉菌株改良是一個比較實用、有效的方法，可克服傳統(tǒng)木霉菌穩(wěn)定性差、防治效果不理想之不足。本文首先對本實驗室成功構(gòu)建的木霉菌REMI轉(zhuǎn)化體是否存在假陽性問題做了鑒定。在此基礎(chǔ)上，系統(tǒng)測定了木霉菌REMI變異株對甜瓜枯萎病的防治效果，同時對防治甜瓜枯萎病具有明顯效果的木霉菌REMI變異株的安全I生進行了研究。通過木霉菌REMI變異株對宿主植物(農(nóng)作物和雜草)生長、根際土壤中主要微生物種群以及對水資源安全性、魚苗生長等生態(tài)

2、因子的影響研究，明確了木霉菌REMI變異株的生物安全性，為今后木霉菌REMI變異株在生物防治中的安全應(yīng)用提供了理論依據(jù)。 采用繼代培養(yǎng)、抗潮霉素檢測和PCR分子檢測相結(jié)合的方法，確定了125個轉(zhuǎn)化體(變異株)是由質(zhì)粒插入到初發(fā)菌株T21染色體中，且生長特性穩(wěn)定。同時，發(fā)現(xiàn)假轉(zhuǎn)化體存在，需要進一步采用Southern blotting來檢測。 通過PDA固體和PD液體培養(yǎng)篩選，從125個木霉REMI變異株篩選出22株生長速

3、度快、產(chǎn)孢量大的優(yōu)良菌株。22株木霉菌變異株對甜瓜枯萎病的防治試驗表明，多數(shù)變異株的防效明顯高于初發(fā)菌株T21，其中Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102等5個變異株的防效最好。Trtrm42、Ttrm26的室內(nèi)防效為78.7％和74.7％，田間防效也分別達到78.1％和73.0％，顯著高于對照苗菌敵的相對防效。同時發(fā)現(xiàn)，用Ttrm42和Ttrm26處理的甜瓜植株，生長健壯，葉片呈深綠色。 針對防

4、治甜瓜枯萎病效果明顯的變異株，研究了其在甜瓜根際土壤中的定殖，結(jié)果表明，Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102等5個變異株均可以在甜瓜根際土壤中定殖，其中Ttrm42的定殖能力最強。 通過研究Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102變異株對其宿主生長的影響發(fā)現(xiàn)，多數(shù)變異株對甜瓜種子和玉米種子安全，并且可以提高種子的出苗率、增長胚根和增加須根數(shù)，還可增加地上鮮重；大部分

5、木霉菌變異株對甜瓜和玉米葉長、葉寬及株高等地上部生長性狀有明顯促進作用，且植株健康無病，葉片大、葉色綠、須根多；Ttrm25、Ttrm26和Ttrm102能夠促進稗草生長、增加地上鮮重和地上干重；Ttrm25、Ttrm26、Ttrm53、Ttrm102及初發(fā)菌株T21對反枝莧的生長有顯著的抑制作用；Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53及初發(fā)菌株T21對苘麻地上部分的生長有明顯的促進作用。 木霉菌變異株對甜瓜根際

6、主要微生物種群數(shù)量有明顯影響。Ttrm102、Ttrm26、Ttrm42處理的甜瓜根際土壤的真菌數(shù)量與對照相比明顯減少，其中Ttrm42處理的真菌數(shù)量最少；Ttrm53、Ttrm102處理的甜瓜根際土壤的細菌數(shù)量與對照相比有所增加；木霉菌變異株對甜瓜根際放線菌的種群數(shù)量影響相對較小。關(guān)于木霉菌變異株對水資源的安全性及對魚類的影響。木霉菌變異株的孢子在自來水和和河水中均不萌發(fā)，存活能力較差，菌體自行消解。所以，對水資源不能造成污染，對魚類