消炎利膽軟膠囊嚙齒動(dòng)物毒性試驗(yàn).pdf

1、目的： 通過消炎利膽軟膠囊嚙齒動(dòng)物毒性試驗(yàn)觀察毒性反應(yīng)，推測毒性靶器官或靶組織，預(yù)測安全劑量范圍，為臨床研究提供參考信息。 方法： 急性毒性試驗(yàn)：60只小鼠隨機(jī)分成6組對應(yīng)l0.0g/kg、7.0g/kg、4.9g/kg3.4g/kg、2.4 g/kg、1.7 g/kg 6個(gè)濃度藥液，灌胃給藥，給藥當(dāng)天詳細(xì)觀察給藥后動(dòng)物的反應(yīng)情況，然后每天早上8：00、下午14：00各觀測一次，連續(xù)觀察14d，以觀察動(dòng)物在短時(shí)間

2、出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。 長期毒性試驗(yàn)：120只大鼠隨機(jī)分成2.5 g/kg、1.0g/kg、0.25g/kg三個(gè)劑量組及溶媒組(橄欖油)，連續(xù)灌胃給藥3 m，觀察消炎利膽軟膠囊對大鼠一般狀態(tài)、體重、血液學(xué)、血液生化學(xué)及病理組織學(xué)的影響以及停藥2 w后上述指標(biāo)改變的恢復(fù)情況。以觀察連續(xù)用藥對動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和嚴(yán)重程度，中毒時(shí)首先出現(xiàn)的癥狀，以及停藥后組織和功能損害的發(fā)展與恢復(fù)情況。 結(jié)果： 急性毒性試驗(yàn)：各組動(dòng)物死亡多

3、發(fā)生在藥后20 min至6 h內(nèi)，表現(xiàn)對刺激反應(yīng)減弱或消失，呼吸困難，心跳漸弱，直至死亡。對死亡動(dòng)物立即解剖，可見胃腸有尚未吸收的藥液。其余內(nèi)臟器官均未見明顯異常。其它各組存活動(dòng)物給藥第l d亦有類似癥狀，但較輕。存活動(dòng)物當(dāng)天或次日即可進(jìn)食，部分動(dòng)物可有少量稀便，觀察14 d，體重隨周齡而增長，未見其它毒性反應(yīng)。消炎利膽軟膠囊的小鼠半數(shù)致死量LD<,50>為4.82g/kg，95％置信區(qū)間為3.99～5.88 g/kg。 長期毒

4、性試驗(yàn)：整個(gè)試驗(yàn)過程沒有一個(gè)動(dòng)物死亡。部分動(dòng)物給藥后1～2 h內(nèi)，有促唾液、汗液分泌(口周及被毛濕潤)作用；各劑量組動(dòng)物毛色晦暗，部分動(dòng)物有脫毛現(xiàn)象。以上現(xiàn)象呈劑量效應(yīng)關(guān)系，推測為藥物效應(yīng)。 體重是體現(xiàn)動(dòng)物生長發(fā)育及一般狀態(tài)比較敏感的重要指標(biāo)，可反映受試物的綜合毒性效應(yīng)。整個(gè)試驗(yàn)過程，各組動(dòng)物體重一直呈增長趨勢，不管給藥期還是恢復(fù)期均是如此。但給藥期各組動(dòng)物體重增長速度不一致，各劑量組體重增長速度比溶媒組緩慢呈一定的劑量效應(yīng)關(guān)系

5、，推測消炎利膽軟膠囊對大鼠體重增長有阻礙作用?；謴?fù)期雄性大鼠體重增長迅速，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果表明，各組動(dòng)物體重差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即各組動(dòng)物體重不一致，多重比較結(jié)果表明14、15 w高劑量組與溶媒組、低劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他各組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測各組動(dòng)物體重不一致是由于停藥時(shí)高劑量組體重低于其它各組較多造成的。雌性各劑量組大鼠體重增長恢復(fù)正常，各組動(dòng)物體重差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即各組動(dòng)物體重增長水平一致。以上結(jié)果表明，消炎利

6、膽軟膠囊對動(dòng)物體重增長有阻礙作用；當(dāng)停止給藥，阻礙作用消失，動(dòng)物體重增長可以恢復(fù)正常。 給藥期和恢復(fù)期各組動(dòng)物飼料日消耗量差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即整個(gè)試驗(yàn)過程中各組動(dòng)物飼料日消耗量一致。 血液學(xué)指標(biāo)及血液生化學(xué)指標(biāo)的變化，可反映受試物對各器官系統(tǒng)功能的影響。消炎利膽軟膠囊各劑量組血液學(xué)指標(biāo)’WBC、NEU、MONO、EOS、PLT、PT的變化及血液生化學(xué)指標(biāo)血清Na<'+>離子濃度、CR、ALT、TP、G、TG、CHOL的

7、變化呈一定的劑量依賴趨勢，提示可能屬于與受試物毒性、組織損傷相關(guān)的效應(yīng)。WBC、NEU、MONO、EOS、PLT的增高主要見于各種感染引發(fā)的疾病、組織損傷或壞死、過敏反應(yīng)、中毒反應(yīng)、腫瘤及血液病。推斷本試驗(yàn)各劑量組WBC、NEU、MONO、EOS、PLT的升高為受試物對動(dòng)物產(chǎn)生的毒性所致。高劑量組動(dòng)物血清Na<'+>離子濃度高于溶媒組動(dòng)物，但其絕對數(shù)值只是比溶媒組高了不到一個(gè)百分點(diǎn)(0.9％)。肝細(xì)胞壞死或肝細(xì)胞通透性增加時(shí)，均可使血清

8、轉(zhuǎn)氨酶含量增加。因此，血清轉(zhuǎn)氨酶活性的高低與肝細(xì)胞受損的程度一致。血清轉(zhuǎn)氨酶活性的測定是反映肝細(xì)胞損害的敏感而重要的指標(biāo)。而血清ALT增加是反映肝細(xì)胞損害的最敏感指標(biāo)之一，本試驗(yàn)各劑量組ALT不同程度升高應(yīng)為藥物對肝臟的不良反應(yīng)所造成。血清CHOL 增高、TG降低可能與肝細(xì)胞損害、膽汁淤積相關(guān)。本試驗(yàn)上述血液學(xué)與血液生化指標(biāo)的改變，可能與藥物的毒性效應(yīng)特別是肝臟損害有關(guān)。TP分為ALB和G兩部分，主要功能是維持血漿膠體滲透壓、pH值、運(yùn)

9、輸作用、營養(yǎng)作用、凝血和抗凝作用以及免疫作用。TP、G濃度相對增高，A/G比值變化并不大，推斷TP、G的變化生物學(xué)意義不大。CR是肌酸的代謝產(chǎn)物，血CR濃度異常升高與腎臟損害程度平行，本試驗(yàn)給藥組CR濃度降低則可能生物學(xué)意義不大?；謴?fù)期后，大部分血液學(xué)指標(biāo)及血液生化學(xué)指標(biāo)都能恢復(fù)。高、中劑量組CR低于溶媒組，如前述生物學(xué)意義不大。高、中劑量組CHOL 高于溶媒組，但并未發(fā)現(xiàn)其它相關(guān)指標(biāo)的明顯改變，推斷CHOL變化的生物學(xué)意義不大。臟器系

10、數(shù)的異?？赡苁鞘茉囄锒拘宰饔玫慕Y(jié)果。臟器系數(shù)增加可能是由于充血、水腫、增生或腫瘤等，臟器系數(shù)降低則可能是由于壞死、萎縮等。本試驗(yàn)由于消炎利膽軟膠囊能明顯阻礙動(dòng)物體重增長，盡管受試物對臟器無明顯毒性效應(yīng)時(shí)亦可能出現(xiàn)臟器系數(shù)的增加，因此，應(yīng)同時(shí)比較臟器絕對濕重的差異以排除可能的假象。消炎利膽軟膠囊致肝臟系數(shù)、肝濕重同時(shí)增加，應(yīng)視為其毒性效應(yīng)；腎臟系數(shù)、睪丸系數(shù)雖然增加，但濕重與溶媒組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是受試物阻礙動(dòng)物體重增長而出現(xiàn)

11、的假象。中劑量組卵巢、子宮濕重低于溶媒組，但其它兩個(gè)用藥組并未見有與之趨勢相同的變化，推測非藥物因素所致?；謴?fù)期各組脾系數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，多重比較各組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測其生物學(xué)意義不大；各組腎系數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高劑量組高于中劑量組，推測為非藥物因素所致。其它各臟器系數(shù)各組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 病理學(xué)檢查是反映藥物毒性效應(yīng)的形態(tài)學(xué)依據(jù)。不管是給藥期還是恢復(fù)期，剖解動(dòng)物，各組動(dòng)物臟器均沒有發(fā)現(xiàn)明顯的眼觀病變。給藥

12、期高劑量組(17只/20只)、中劑量組(10只/20只)動(dòng)物肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變、嗜酸性變、疏松化變及點(diǎn)狀壞死，低劑量組(3只/20只)及溶媒組(2只/20只)亦分別有個(gè)別動(dòng)物有類似改變但程度輕微?；謴?fù)期高劑量組(1只/10只)、中劑量組(2只/10只)、低劑量組(1只/10只)、溶媒組(1只/10只)均有個(gè)別動(dòng)物肝細(xì)胞點(diǎn)狀或灶性壞死。本試驗(yàn)給藥期及恢復(fù)期各組之間肝臟組織病理學(xué)變化比較，結(jié)合本單位大鼠長期毒性試驗(yàn)相關(guān)歷史數(shù)據(jù)(蒸餾水或橄欖油

13、灌胃3 m，肝臟病理組織學(xué)基本正?；騼H1～3只/20只有輕度病理改變)分析，本試驗(yàn)肝臟病理改變主要由供試藥物所致；給藥期高劑量組動(dòng)物腎小管上皮細(xì)胞玻璃樣變亦可能與供試藥物有關(guān)；本試驗(yàn)中部分動(dòng)物肺間質(zhì)及支氣管炎癥改變及胃、腸粘膜的炎細(xì)胞浸潤，不同試驗(yàn)期及組間比較，病理表現(xiàn)及程度類似，結(jié)合本單位大鼠長期毒性試驗(yàn)相關(guān)歷史數(shù)據(jù)(蒸餾水或橄欖油灌胃3 m，約有3～5只/20只動(dòng)物出現(xiàn)肺間質(zhì)及支氣管炎癥改變及胃、腸粘膜的炎細(xì)胞浸潤)，推測非受試物因