云南羊肚菌分類及其生長土壤微生物群落結(jié)構(gòu)分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、羊肚菌的人工栽培至今未能成功,半人工栽培中不僅要求覆土,而且要求覆土中含有刺激其結(jié)實(shí)機(jī)制的有益微生物,因此找出有助于結(jié)實(shí)的關(guān)鍵微生物種類,模仿其野生環(huán)境,這或許是羊肚菌栽培取得成功的較方便的途徑。 本論文從羊肚菌的生長環(huán)境著手,主要考慮羊肚菌生長土壤中的微生物區(qū)系,采用變性梯度凝膠電泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis)技術(shù)以土壤微生物群體的基因組DNA為研究對象,通過比較不同土壤中

2、各種微生物的rDNA基因信息了解其多樣性。通過對比羊肚菌生長土壤及對照不長羊肚菌土壤中微生物群落結(jié)構(gòu),找出羊肚菌生長土壤中特殊種群;通過對比不同地區(qū)羊肚菌生長土壤找出不同地方羊肚菌的微生物群落結(jié)構(gòu)的異同;從而為今后實(shí)現(xiàn)羊肚菌的人工栽培提供一些參考依據(jù),所做工作主要分為以下幾部分。 (1)依據(jù)子實(shí)體形態(tài)差異,挑選了14個(gè)羊肚菌子實(shí)體(其中11個(gè)來自云南,3個(gè)來自浙江),利用通用引物對(ITS<,1>、ITS<,4>)擴(kuò)增rDNA的

3、ITS區(qū),PCR產(chǎn)物經(jīng)純化回收、克隆、測序,然后在GenBank中進(jìn)行序列比對,找相似性較高的種屬,以確定云南的羊肚菌種以及各種之間序列的差異。結(jié)果表明,云南的11個(gè)羊肚菌子實(shí)體可分為4個(gè)種:高羊肚菌(Morchella elata)、尖項(xiàng)羊肚菌(Morchella conica)、粗柄羊肚菌(Morchella crassipes)和大孔(寬肋)羊肚菌(Morchella costata),其中大孔(寬肋)羊肚菌在云南是首次發(fā)現(xiàn)。浙江

4、的3個(gè)羊肚菌子實(shí)體經(jīng)鑒定為未知羊肚菌種。采集的14個(gè)羊肚菌子實(shí)體樣品和GenBank中黑脈(小頂)羊肚菌[Morchella angusticep (AJ698476)]、美味羊肚菌[Morchella esculenta (AJ698475)],以及羊肚菌科常見屬鐘菌屬Verpa conica(AJ544206)的ITS序列聚類,以鐘菌(AJ544206)作為外類群,可分為三大聚類群,高羊肚菌、大孔(寬肋)羊肚菌、黑脈(小頂)羊肚菌為

5、第1類群(Groupl);美味羊肚菌、尖頂羊肚菌為第2類群(Group2);粗柄羊肚菌和M<,12>、M<,13>、M<,14>為第3類群(Group3)。發(fā)現(xiàn)一種ITS 5.8s與其他存在巨大變異的羊肚菌,有可能為新的種。 (2)半人工栽培要求覆土,可能覆土中含有刺激其結(jié)實(shí)機(jī)制的有益微生物或相關(guān)代謝物質(zhì),羊肚菌子實(shí)體內(nèi)生菌,勢必與羊肚菌的生長存在密切關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)采用DGGE電泳技術(shù),避開傳統(tǒng)的純培養(yǎng)不能全面反映內(nèi)生菌種群的弊端

6、,先從子實(shí)體中含有的細(xì)菌著手,旨在通過其對其種類的鑒定,找出與羊肚菌生長關(guān)系密切的細(xì)菌種群。結(jié)果表明,共測序得到7種內(nèi)生細(xì)菌,PCR-DGGE方法可以在一定程度上反應(yīng)微生物群落結(jié)構(gòu)。 (3) 通過PCR-DGGE的方法,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:①所取4種土樣樣品中所測序的15種細(xì)菌主要?dú)w屬于擬桿菌門、放線菌門、厚壁菌門和變形菌門,其中以擬桿菌門的細(xì)菌最多,有5-7種,放線菌門的有2-3種,厚壁菌門2種,變形菌門2種,綠彎菌門1種。羊肚菌生

7、長土壤與相對應(yīng)的附近菜園土相比,在優(yōu)勢種群上并無很大區(qū)別,4種土樣的優(yōu)勢種群基本相同。②羊肚菌生長土壤中,測序得到的12種真菌中,子囊菌亞門盤菌綱的有10種,2種擔(dān)子菌亞門異形擔(dān)子菌綱,有盤菌綱,異形擔(dān)子菌綱。結(jié)合對照中測序得到的盤菌綱真菌種類,盤菌綱真菌群落存在很大的差異。 本文了解到了羊肚菌生長土壤中存在的細(xì)菌和真菌種類,并得到了羊肚菌生長土壤中盤菌綱的真菌種類比較多的結(jié)論,對于羊肚菌的生長和盤菌綱的真菌是否真有關(guān)系,目前還

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