利用SSR鑒定觀賞桃種質(zhì)資源親緣關(guān)系的研究.pdf

1、本研究采用SSR標記技術(shù)對來源于中國科學(xué)研究院鄭州果樹研究所的19個觀賞桃品種和北京市農(nóng)林科學(xué)院的3個觀賞桃品種進行了親緣關(guān)系分析。本文主要探討了觀賞桃的DNA提取方法，SSR-PCR的體系優(yōu)化，銀染技術(shù)，SSR引物的篩選以及22個觀賞桃品種的親緣關(guān)系分析。主要成果如下:
　　(1)實驗技術(shù)體系構(gòu)建
　　根據(jù)文獻比較和實驗驗證，最終確定以劉燕(2011)的改良CTAB法進行總DNA的提取。采用L25(56)正交設(shè)計方案，確定

2、25μl體系“模板DNA（20ng/μl）3μl，引物（10μM)1.0μl,Mg2+(25 mM)2.0μl,dNTPs(2.5 mM)3.0μl,TaqDNA聚合酶(2.5 U/μl)0.8μl，10×Buffer（free Mg2+）”作為SSR-PCR反應(yīng)體系。通過文獻比對和實驗摸索，確定了銀染方法:先用流水沖洗帶凝膠的短玻璃板10秒鐘，然后放置10％冰醋酸中固定30分鐘，再用流水沖洗半秒鐘，置于1‰染色AgNO320分鐘，再用

3、流水快速沖洗，最后放置于1.5％ NaOH和0.25％甲醛中顯色。
　　(2)SSR引物篩選
　　從E Dirlewanger等人(2002)報道的41對SSR引物篩選出12對多態(tài)性高的單位點擴增引物。12對引物共擴增出44個多態(tài)性條帶，多態(tài)性比例均為100％，每對引物擴增出2-5條多態(tài)性條帶，平均每對引物擴增出3.7條多態(tài)性條帶。
　　(3)22個觀賞桃品種的親緣關(guān)系分析
　　利用NT SYS2.10E軟件進行

4、聚類，分析結(jié)果表明，在相似系數(shù)為0.66時，22個觀賞桃品種被聚為直枝型、矮化型和垂枝型3類。直枝型包括‘紅葉碧桃，、‘報春’、‘灑紅’、‘紅繡球’、‘單粉’、‘春艷’、‘二色桃’、‘月季桃，、‘錦春，和‘賀春，;矮化型包括‘壽紅’、‘紅菊花’、‘菊花桃’、‘滿山紅’和‘滿天紅，;垂枝型包括:‘單瓣垂枝’、‘垂枝1’、‘垂枝2’、‘白重瓣垂枝’、‘朱粉垂枝2’、‘朱粉垂枝1，和‘紅葉垂枝’。
　　結(jié)果支撐了把枝型作為比花型更高級的