MDRV S基因組序列分析及σC-ELISA診斷方法的建立.pdf

1、本研究對(duì)番鴨呼腸孤病毒S12和S14毒株S基因組(S1.4)s A/s B/s NS/s C的編碼基因進(jìn)行了克隆和測(cè)序。序列分析表明：DRV與ARV的s A/s NS編碼基因的核苷酸同源性分別為76.0％～77.1％和78.4％～79.6％，氨基酸同源性分別為89.5％～91.2％和91.6％～92.7％；而具有誘導(dǎo)群特異性和型特異性中和抗體的s B/s C編碼基因的核苷酸同源性分別為60.3％～64.4％和2.7％～9.9％，氨基酸同

2、源性分別為61.4％～62.0％和22.6％～26.7％;DRV和ARV抗原性存在差異。而DRV S12/S14與法國(guó)89026株s A/s B/s NS/s C編碼基因的核苷酸同源性分別為90.0％、93.6％、87.9％～88.0％和93.1％，氨基酸同源性分別為97.1％、94.3％、95.7％～95.9％和93.7％。進(jìn)化分析表明：DRV與ARV形成不同的分支，DRV在正呼腸孤病毒屬中是不同于ARV的一種新的呼腸孤病毒。

3、 同時(shí)，本研究將編碼外殼蛋白σ C的基因克隆于原核表達(dá)載體pET32a上，經(jīng)過(guò)EcoR I和Sac Ⅰ雙酶切鑒定和序列分析后，得到陽(yáng)性重組質(zhì)粒pET32a-σ C；將陽(yáng)性重組質(zhì)粒pET32a-σ C轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE和Western-blbtting檢測(cè)分析，融合表達(dá)的蛋白能夠與番鴨呼腸孤病毒感染的康復(fù)鴨血清發(fā)生特異性反應(yīng)；將融合表達(dá)的蛋白純化后作為包被抗原，建立了檢測(cè)鴨血清中呼腸孤病毒抗