CXCR4-SDF-1α調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶的分泌與小鼠肝癌細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移的相關(guān)性.pdf

1、淋巴道轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞播散的最早途徑，臨床預(yù)后差。對(duì)CXCR4/SDF-1α與腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移間的相關(guān)性研究，不論從理論上還是臨床應(yīng)用上都具有一定的意義：一方面，可以拓展人們的視野，對(duì)CXCR4/SDF-1α有一個(gè)全面的認(rèn)識(shí)—它們不僅在炎癥等過程中發(fā)揮重要的生理功能，而且可能參與腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的過程，在更多的生理或病理過程中起到相應(yīng)的作用；另一方面，由于CXCR4僅在某些特定的細(xì)胞表達(dá)。因此通過干預(yù)CXCR4/SDF-1α生物學(xué)軸而抑制腫瘤

2、器官特異性轉(zhuǎn)移的方法將可能用于臨床。 本文的主要工作如下：Ⅰ.趨化因子受體CXCR4在小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-F和Hca-P的表達(dá)鑒定1.用RT-PCR方法檢測(cè)了Hca-F和Hca-P細(xì)胞株CXCR4mRNA的表達(dá)。 2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)CXCR4在Hca-F、Hca-P細(xì)胞株的表達(dá)結(jié)果與RT-PCR結(jié)果相符合，CXCR4在Hca-F、Hca-P細(xì)胞表面表達(dá)水平不同，CXCR4在高轉(zhuǎn)移潛能小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-F的表達(dá)(24

3、.21﹪-35.38﹪)高于低轉(zhuǎn)移潛能小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-P(5.67﹪-8.94﹪)的表達(dá)。 3.為進(jìn)一步明確Hca-F、Hca-P細(xì)胞表達(dá)的CXCR4是否具有功能，通過鈣離子內(nèi)流實(shí)驗(yàn)，用CXCR4的配體SDF-1α作用Hca-F和Hca-P細(xì)胞后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)了這兩種細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度的變化情況，以鈣離子熒光指示劑Fluo-3/AM負(fù)載細(xì)胞，檢測(cè)到SDF-1α刺激20秒后細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。 以上結(jié)果說明

4、，趨化因子受體CXCR4在Hca-F、Hca-P細(xì)胞表面表達(dá)水平不同，從而導(dǎo)致它們的功能狀態(tài)不同。 Ⅱ.CXCR4表達(dá)水平對(duì)小鼠腹水型肝癌細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移潛能的影響用抗CXCR4抗體封閉CXCR4的表達(dá)，通過歸巢實(shí)驗(yàn)觀察Hca-F細(xì)胞向淋巴結(jié)遷移的情況。 Ⅲ.CXCL12/CXCR4介導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶的分泌與小鼠肝癌細(xì)胞特異性淋巴道轉(zhuǎn)移的關(guān)系 1.淋巴結(jié)勻漿誘導(dǎo)HCa-F和HCa-P細(xì)胞分泌MMPs的酶譜：加入淋巴結(jié)

5、勻漿后HCa-F細(xì)胞分泌MMP-9顯著增多，同時(shí)分泌活性MMP-9及MMP-2；HCa-P細(xì)胞分泌MMP-9也顯著增多并分泌活性型MMP-9和MMP-2，但量均少于HCa-F細(xì)胞。對(duì)照孔淋巴結(jié)勻漿離心后的上清中未能測(cè)出MMPs。 2.SDF-1α誘導(dǎo)Hca-F和Hca-P細(xì)胞分泌活性MMP-9和MMP-2：為了闡明淋巴結(jié)勻漿中何種成分誘導(dǎo)Hca-F和Hca-P細(xì)胞分泌MMP-9和MMP-2，通過用趨化因子SDF-1α活化Hca-

6、F、Hca-P細(xì)胞，經(jīng)SDF-1α24小時(shí)作用后。 3.CXCR4/SDF-1α對(duì)Hca-F和Hca-P細(xì)胞分泌MMP-9和MMP-2的調(diào)控為了進(jìn)一步證明CXCR4/SDF-1α對(duì)Hca-F和Hca-P細(xì)胞分泌MMP-9和MMP-2的調(diào)控作用，用抗CXCR4抗體封閉兩種細(xì)胞的CXCR4表達(dá)。 通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了CXCR4/SDF-1α能介導(dǎo)小鼠肝癌細(xì)胞Hca-F和Hca-P分泌基質(zhì)金屬蛋白酶。Hca-F和Hca-P細(xì)胞通過表

7、達(dá)功能性的趨化因子受體CXCR4，并與淋巴管內(nèi)皮分泌的趨化因子SDF-1α相互作用來調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶的分泌?？梢酝茢嘤捎谠贖ca-F、Hca-P細(xì)胞表面CXCR4表達(dá)水平不同，CXCR4在高轉(zhuǎn)移潛能小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-F的表達(dá)高于低轉(zhuǎn)移潛能小鼠肝癌細(xì)胞系Hca-P的表達(dá)。使得SDF-1α誘導(dǎo)Hca-F、Hca-P細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶的量具有顯著差異。因?yàn)槟[瘤細(xì)胞需要突破基底膜屏障侵出淋巴管壁，定位于靶器官完成轉(zhuǎn)移。說明CXCR4/