有毒生物堿中毒的檢測技術(shù)研究.pdf

1、目的：建立快速、準(zhǔn)確、靈敏的高效液相色譜-紫外、高效液相色譜-質(zhì)譜、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定體液中馬錢子堿、士的寧、麻黃堿、烏頭堿和秋水仙堿的分析方法. 方法：全血樣品經(jīng)1﹪三氟醋酸乙腈溶液提取、尿樣經(jīng)鹽酸酸化后,用Oasis<〇R>MCX小柱進行凈化. 1、色譜柱:XBridge<'TM> Shield RPl8柱(250mmx3.0mm i.d.,5 μm);流動相:(A):乙腈,(B):10mmol/L碳酸

2、氫銨(氨水調(diào)節(jié)pH=10.5),梯度洗脫;流速:0.5 mL/min;柱溫:35℃;UV檢測波長:235 nm,外標(biāo)法定量. 2、色譜柱:ZORBAX Eclipse SB-C<,18>柱(250mm×4.6mm i.d.,5μm);流動相:(A):乙腈,(B):0.04﹪三氟醋酸,梯度洗脫;流速:0.5 mUmin;柱溫:35℃;UV檢測波長:235 nm,外標(biāo)法定量. 3、色譜條件按方法(1),通過電噴霧電離離子化在

3、選擇離子監(jiān)測(SIM)模式下測定,定量分析離子:馬錢子堿m/z:395[M+H]<'+>;士的寧m/z:335[M+H]<'+>;麻黃堿m/z:166[M+H]<'+>;烏頭堿m/z:646[M+H]<'+>;秋水仙堿m/z:400[M+H]<'+>,外標(biāo)法定量. 4、色譜條件按方法(2),通過電噴霧電離離子化在選擇離子監(jiān)測(SIM)模式下測定,定量分析離子:馬錢子堿m/z:395[M+H]<'+>;士的寧m/z:335[M+H

4、]<'+>;麻黃堿m/z:166[M+H]<'+>;烏頭堿m/z:646[M+H]<'+>;秋水仙堿m/z:400[M+H]<'+>,外標(biāo)法定量. 5、色譜條件按方法(1),通過電噴霧電離離子化在多離子反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式下測定,定量分析離子:馬錢子堿m/z:324[M+H]<'+>;士的寧m/z:264[M+H]<'+>;麻黃堿m/z:148[M+H]<'+>:烏頭堿m/z:586[M+H]<'+>;秋水仙堿m/z:382[

5、M+H]<'+>,外標(biāo)法定量. 結(jié)果： 1、按方法(1):馬錢子堿、士的寧、麻黃堿、烏頭堿和秋水仙堿在0.1,-50.0 mg/L的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,最低定量檢出限為0.05 mg/L,五種生物堿在尿液中的回收率為91.0～105.0﹪,血液中為82.0～109.0﹪,其日內(nèi)精密度<7.0﹪,其日間精密度<9.9﹪. 2、按方法(2):馬錢子堿、士的寧、麻黃堿、烏頭堿和秋水仙堿在0.1～50.0 mg/L的

6、濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,最低定量檢出限為0.07mg/L,五種生物堿在尿液中的回收率為82.0～110.0﹪,血液中為80.0～107.0﹪,其日內(nèi)精密度<7.8﹪,其日間精密度<10.2﹪. 3、按方法(3):馬錢子堿、士的寧、麻黃堿、烏頭堿和秋水仙堿在0.5～100.0 ng/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,馬錢子堿、士的寧、麻黃堿和烏頭堿最低定量檢出限為0.5ng/mL,秋水仙堿最低定量檢出限為0.05 ng/mL,五種生物

7、堿在尿液中的回收率為81.4～106.0﹪,血液中為86.0～106.7﹪,其日內(nèi)精密度<8.9﹪,其日間精密度<9.3﹪. 4、按方法(4):馬錢子堿、士的寧、麻黃堿、烏頭堿和秋水仙堿在5.0～500.0 ng/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,最低定量檢出限為5.0ng/mL.五種生物堿在尿液中的回收率為83.5～110.0﹪,血液中為83.1～112.9﹪,其日內(nèi)精密度<8.6﹪,其日間精密度<10.5﹪. 5、按方法

8、(5):馬錢子堿在0.05～50.0 ng/mL,士的寧、麻黃堿在0.1～50.0 ng/mL烏頭堿、秋水仙堿在0.01～10.0 mg/L的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,馬錢子堿、士的寧、麻黃堿、烏頭堿和秋水仙堿最低定量檢出限分別為0.03、0.05、0.20、0.05、0.01 ng/mL五種生物堿在尿液中的回收率為80.0～113.0﹪,血液中為80.0～110.0﹪,其日內(nèi)精密度<7.9﹪,其日間精密度<10.6﹪. 結(jié)論：