彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠衰老腦細(xì)胞和PC12細(xì)胞DNA損傷與修復(fù).pdf

1、同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠衰老腦細(xì)胞和PC12細(xì)胞DNA損傷與修復(fù)姓名：韓宗超申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張?zhí)K明;方思羽19990501彗星實(shí)驗(yàn)} 盤洲太融衰= 老腦細(xì)胞和P C I 2 細(xì)胞D N A 損傷與修復(fù) 同濟(jì)醫(yī)科丈學(xué)碩士學(xué)位論文第一部分彗星實(shí)驗(yàn)檢溯氧化介導(dǎo)的大鼠衰老神經(jīng)細(xì)胞D 姒損傷與修復(fù)【摘要】目的為了確定腦細(xì)胞D N A 損傷敏感性和D N A 修復(fù)能力與衰老過(guò)程的關(guān)系，本研究運(yùn)用鹼性單細(xì)胞電

2、泳法( 又稱彗星實(shí)驗(yàn)) 觀鋇4 了過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的衰老神經(jīng)細(xì)胞D N A 損傷與修復(fù)的情況。方法經(jīng)不同濃度H 。O 。處理的3 月鼠( 1 0 只) ．8 月鼠( 8 只) 和2 6 月鼠( 5 只) 的腦皮質(zhì)、海馬和基底節(jié)經(jīng)分離的腦細(xì)胞，未經(jīng)H 2 0 ，處理的細(xì)胞作為對(duì)照組。細(xì)胞與低熔點(diǎn)瓊脂糖混合，制片，裂解，解旋，經(jīng)電泳和熒光染色后，有氧化損傷的單鏈D N A 斷裂細(xì)胞在熒光顯微鏡觀察下呈彗星樣改變。光學(xué)記錄單視野并作彗星圖象分析。

3、運(yùn)用拖尾細(xì)胞頻率等指標(biāo)確定受損單鏈D N A 斷裂的細(xì)胞及其損傷程度分級(jí)。結(jié)果衰老腦細(xì)胞D N A 較正常腦細(xì)胞更易受到氧化損傷。在相同干預(yù)條件下，皮質(zhì)細(xì)胞較海馬、基底節(jié)區(qū)細(xì)胞更易受損傷。給予O ．5 - 4 h 孵育后，表明腦細(xì)胞最大修復(fù)時(shí)間僅為1 h ，且衰老腦細(xì)胞較正常腦細(xì)胞的D N A 修復(fù)能力差。結(jié)論彗星實(shí)驗(yàn)是一種非常敏感的用來(lái)檢測(cè)D N A 損傷與修復(fù)的方法。該實(shí)驗(yàn)提供了一個(gè)很好的檢測(cè)衰老腦細(xì)胞D N A 氧化損傷與修復(fù)的細(xì)

4、胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀！娟P(guān)鍵詞】衰老神經(jīng)細(xì)胞D N A 損傷D N A 修復(fù)P e r o x i d e - m e d i a t e dD N A d ．1 M l 也．g e a n dr e p a i ri nt h eb r a i nc e l l si nt h ea g i n gr a t sd e t e c t e db yt h ea l k a l i n es i n g l e c e l lg e l e l