銀杏種子發(fā)育及其內(nèi)生菌研究.pdf

1、研究了銀杏種子發(fā)育過程的解剖結(jié)構(gòu)以及銀杏種子的內(nèi)生菌。對銀杏種子內(nèi)生菌的研究包括:分離并鑒定銀杏種子的內(nèi)生菌類型,將得到的內(nèi)生菌進(jìn)行抑菌以及產(chǎn)酶活性的初步篩選。主要研究結(jié)果如下:
　　一、銀杏胚珠的發(fā)育的解剖結(jié)構(gòu)
　　1)觀察到授粉后不育胚珠的珠心基部出現(xiàn)退化組織區(qū)。珠心基部組織的退化形成對珠心中雌配子體發(fā)育的水分或營養(yǎng)供應(yīng)減弱或終止,使胚珠停止繼續(xù)發(fā)育。
　　2)認(rèn)為銀杏胚珠的傳粉滴,是或主要是珠心頂端組織解體形成貯

2、粉室時產(chǎn)生的汁液溢出形成。
　　3)胚乳與珠心組織之間存在一非細(xì)胞性的膜質(zhì)層,該膜質(zhì)層可能來自大孢子后壁。在胚乳發(fā)育中,珠心組織不消失而最終成為胚乳的膜狀包被層,該被層在種子前半部分的種腔處,與種皮隔于種腔而分離;在種子下半部分與種皮(內(nèi)種皮)緊密連合。
　　4)珠被分化為肉質(zhì)的外種皮、骨質(zhì)的中種皮和膜質(zhì)的內(nèi)種皮;但內(nèi)種皮在分化早期在種子前端的種孔和種腔周圍明顯增厚,含較多汁液,可能為胚乳的發(fā)育提供一部分營養(yǎng)。種腔的功能可能

3、是積聚從種孔來的水分以維持種子的萌發(fā)。
　　二、銀杏種子的內(nèi)生菌的分離和鑒定
　　在銀杏種子中共分離出7株內(nèi)生菌,包括5株內(nèi)生細(xì)菌,2株內(nèi)生放線菌。
　　三、銀杏種子的內(nèi)生菌抗菌活性初步篩選
　　采用平板對峙法對7個菌株進(jìn)行8種病原真菌拮抗活性的篩選,其中KLBMP3491和KLBMP3496兩株菌對所有指示病原菌均具有一定程度的抑制作用。
　　四、對從銀杏種子中分離得到的內(nèi)生菌產(chǎn)酶活性進(jìn)行初步篩選

4、　　1)從已獲得的菌株中篩選到一株內(nèi)生細(xì)菌,編號為KLBMP3495,其產(chǎn)纖溶酶和纖維素酶的活性均很高,經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌。
　　2)對KLBMP3495的酶學(xué)特征進(jìn)行了研究,結(jié)果表明纖溶酶作用時的最佳溫度是35℃,最適酸堿度為8.0;CMC酶反應(yīng)的最適溫度為55℃,最適pH為7.0。Native-PAGE表明菌株KLBMP3495發(fā)酵液具有纖溶酶和CMC酶活性。
　　3)采用單因子和正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法,對KLBMP34

5、95的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,內(nèi)生菌產(chǎn)纖溶酶的最佳培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分為:蔗糖1.5％、玉米粉0.5%、KNO30.5%、黃豆粉餅1.5%;最佳培養(yǎng)條件為初始pH8.0,溫度35℃,轉(zhuǎn)速為160r/min,種子液的接種量2%,裝液量為60mL/250 mL,菌體培養(yǎng)時間為90h。纖維素酶的最佳液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成分為CMC-Na1.0%、玉米粉0.5%、NH4 NO30.3%、黃豆粉餅2%;培養(yǎng)條件為pH7.5,培養(yǎng)