自體口腔黏膜微粒移植修復(fù)創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究及在陰道再造術(shù)中的臨床應(yīng)用.pdf

1、目的： 觀(guān)察自體口腔黏膜微粒移植后的成活生長(zhǎng)情況，明確微粒黏膜移植于創(chuàng)面后的黏膜化過(guò)程及愈合速度，探討不同的黏膜微粒形態(tài)和分布形式對(duì)創(chuàng)面愈合的影響，并探索提高創(chuàng)面上皮化速度的方法。 材料與方法： 1.在實(shí)驗(yàn)用豬的體表制備若干3×3c㎡全層皮膚缺損創(chuàng)面，將自體微粒黏膜擴(kuò)張面積比例(即移植黏膜面積與創(chuàng)面面積比例)均設(shè)定為1：9，根據(jù)剪碎黏膜的時(shí)間不同，將創(chuàng)面分別隨機(jī)分為5分鐘組(Ⅰ組)、8分鐘組(Ⅱ組)、10分鐘組(

2、Ⅲ組)、15分鐘組(Ⅳ組)及空白對(duì)照組(Ⅴ組)，分別將各組微粒黏膜移植于創(chuàng)面，并應(yīng)用MTT法測(cè)量各組微粒黏膜的細(xì)胞活力。觀(guān)察不同的微粒黏膜形態(tài)及在創(chuàng)面的分布形式，術(shù)后1周、2周、3周觀(guān)察各組創(chuàng)面愈合情況，并行HE染色、免疫組織化學(xué)染色，第3周行掃描電鏡和投射電鏡觀(guān)察。 2.觀(guān)察加速創(chuàng)面上皮化時(shí)，將剪碎黏膜的時(shí)間均設(shè)為8分鐘，并將同樣大小的體表創(chuàng)面隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A組)、微粒黏膜移植組(B組)、BMSCs+微粒黏膜移植組(C組

3、)、BMSCs移植組(D組)、微粒黏膜—微粒皮混合移植組(E組)。術(shù)后1周、2周、3周比較各組創(chuàng)面上皮化情況，并行HE染色、免疫組織化學(xué)染色。 結(jié)果： 1.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組的黏膜微粒在數(shù)量、面積、周長(zhǎng)、等效直徑、形狀因子等各項(xiàng)指標(biāo)均有不同，對(duì)4組微粒黏膜的總周長(zhǎng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)各組之間均存在顯著性差異(P<0.05)。 2.術(shù)后1周，Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組可見(jiàn)微粒黏膜成活并向外擴(kuò)展生長(zhǎng)，Ⅰ組成活的黏膜微粒較孤立，Ⅱ

4、組的創(chuàng)面愈合率超過(guò)70％，Ⅴ組為肉芽創(chuàng)面。術(shù)后2周，Ⅱ組的新生黏膜融合成片，創(chuàng)面愈合率在85％以上；而Ⅰ組、Ⅲ組和Ⅳ組新生黏膜未完全成片，Ⅱ組優(yōu)于Ⅰ組、Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.05)。術(shù)后3周，各實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面已經(jīng)基本粘膜化，Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的新生黏膜較光滑、質(zhì)地厚，其中Ⅱ組的創(chuàng)面愈合率優(yōu)于Ⅰ組和Ⅲ組(P<0.05)；而Ⅳ組的新生黏膜較薄，且Ⅰ組和Ⅲ組的創(chuàng)面愈合率優(yōu)于Ⅳ組(P<0.05)。 3.術(shù)后1、2、3周，實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各組的

5、上皮細(xì)胞層數(shù)隨時(shí)間逐漸增多，極性排列隨時(shí)間變佳，Ⅱ組的細(xì)胞層數(shù)最多，極性排列最好；各組廣譜角蛋白陽(yáng)性染色也隨時(shí)間逐漸增強(qiáng)，Ⅱ組的表達(dá)最強(qiáng)且完整連續(xù)。 4.微粒黏膜細(xì)胞活力比較，Ⅰ組平均OD值最高，Ⅰ組與Ⅱ組無(wú)顯著性差異(P>0.05)，其它各組之間比較P<0.05。 5.微粒黏膜與微粒皮復(fù)合移植組(E組)在術(shù)后1、2、3周的創(chuàng)面愈合率明顯高于其它各組(P<0.05)。HE染色發(fā)現(xiàn)皮膚與黏膜的交界處可以明顯區(qū)分，黏膜處的上

6、皮細(xì)胞層數(shù)明顯多于皮膚處的上皮細(xì)胞，皮膚處存在角化層，黏膜處為不全角化，黏膜的釘突粗而深大。 結(jié)論： 1.微粒黏膜移植于創(chuàng)面后可以形成完整的片狀黏膜，將面積擴(kuò)增比為1：9的豬口腔黏膜微粒移植于創(chuàng)面，術(shù)后3周形成的黏膜上皮較完整，上皮質(zhì)量較好。 2.微粒黏膜的形態(tài)及在創(chuàng)面的分布形式對(duì)創(chuàng)面愈合有影響，制備的黏膜微粒直徑平均約為0.7mm，面積平均約為0.46m㎡，單位創(chuàng)面上分布的黏膜微粒數(shù)約25個(gè)/c㎡時(shí)，其移植于創(chuàng)

7、面后的愈合速度最快，形成的黏膜上皮質(zhì)量最好。 3.微粒黏膜與微粒皮復(fù)合移植可以加速創(chuàng)面的上皮化速度，但移植成活后仍保持其本身的組織特性。 目的： 探討自體口腔黏膜微粒移植行陰道再造的手術(shù)方法及其療效，并對(duì)再造的陰道分別通過(guò)形態(tài)學(xué)、組織學(xué)、微環(huán)境以及功能學(xué)來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)，進(jìn)一步明確該方法的意義。 材料與方法：自2006年7月至2008年9月，收治11例先天性無(wú)陰道及1例陰道再造術(shù)后7年繼發(fā)陰道狹窄患者，年齡19

8、～30歲，平均24.6歲。手術(shù)在患者兩側(cè)頰部及上下唇內(nèi)側(cè)黏膜區(qū)域點(diǎn)片狀切取口腔黏膜，并剪碎成直徑約0.7mm的微粒，將微粒黏膜撒布于明膠海綿條上后移植于直腸與尿道之間的陰道再造腔穴。術(shù)后隨訪(fǎng)時(shí)測(cè)量再造陰道的深度及寬度，行陰道鏡檢查和陰道造影；取陰道壁組織行組織學(xué)檢測(cè)；行人工陰道分泌物常規(guī)檢查和PH值檢測(cè)；對(duì)術(shù)后6個(gè)月以上的已有性生活的患者進(jìn)行女性性功能的問(wèn)卷調(diào)查并與正常女性性功能進(jìn)行比較。 結(jié)果： 1.12例手術(shù)均獲成功

9、，手術(shù)時(shí)間平均約為112min(90～140min)，術(shù)中出血約80～100ml，平均住院時(shí)間為14天(10～19天)，再造陰道完全上皮化的時(shí)間平均約為14天。所有患者均隨訪(fǎng)，平均隨訪(fǎng)時(shí)間約14個(gè)月(4～26個(gè)月)?？谇粌?nèi)供黏膜區(qū)域無(wú)繼發(fā)畸形。 2.所有患者術(shù)后外陰及陰道外口形態(tài)自然，會(huì)陰區(qū)無(wú)任何手術(shù)痕跡。再造陰道深約8cm，寬能容納兩橫指。再造陰道壁的黏膜光滑、濕潤(rùn)，呈粉白色，彈性好，近陰道外口處陰道壁可見(jiàn)皺襞。組織學(xué)提示為復(fù)

10、層鱗狀上皮，未出現(xiàn)角化。陰道內(nèi)可見(jiàn)淺黃色分泌物，平均PH值約為6.2(5.5～7.0)。 3.12例患者中有8例患者已結(jié)婚，7例行女性性功能的問(wèn)卷調(diào)查，對(duì)性生活均較滿(mǎn)意。再造陰道組的性功能總評(píng)分和性高潮評(píng)分與正常對(duì)照組存在顯著性差異(P<0.05)；而在性欲、性興奮、陰道濕潤(rùn)度、性滿(mǎn)意度及性舒適度評(píng)分無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1.應(yīng)用自體口腔黏膜微粒游離移植可行陰道再造，手術(shù)操作簡(jiǎn)單，創(chuàng)傷小，供區(qū)及