RNAi沉默STAT1對支氣管哮喘小鼠氣道炎癥的調(diào)控作用研究.pdf

1、目的:信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)參與IFN(干擾素)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,是STAT家族中第一個被發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子,它在先天性免疫中是必需的。IFN-γ、IL-4等完成細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程是通過JAK／STAT途徑激活STAT1而誘導(dǎo)目的基因表達(dá),從而導(dǎo)致哮喘患者氣道的炎癥和高反應(yīng)性。本實驗用特異性STAT1 siRNA(smallinterfering RNA)滴鼻沉默支氣管哮喘小鼠氣道上皮細(xì)胞STAT1后,檢測其肺組織ST

2、AT1的表達(dá)水平及炎癥細(xì)胞數(shù)量,探討STAT1特異性siRNA對支氣管哮喘小鼠氣道炎癥的調(diào)控作用,為基因治療支氣管哮喘等炎癥性疾病奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:24只BALB／c小鼠隨機平均分為PBS組、PG-HK(隨機片段RNAi)組和STAT1(pGSTAT1-2)組。用新鮮配制的OVA／Al(OH)3混懸液(100mgOVA和100mgAl(OH)3干粉加入1ml生理鹽水制成),分別于第1天和第14天腹腔注射致敏,用已構(gòu)建好的S

3、TAT1siRNA于第26—29天滴入STAT1組,另2組分別用等容量的PBS液體,隨機片段RMAⅰ滴鼻,在第28—30天用OVA溶液滴鼻激發(fā)哮喘,末次滴鼻后12小時處死小鼠留取肺泡灌洗液(BALF)計數(shù)浸潤的炎癥細(xì)胞數(shù),檢測其中的γ干擾素(IFN-γ),白細(xì)胞介素4(IL-4)水平,肺組織切片做免疫組織化學(xué)染色、PAS(過碘雪夫酸)染色及HE染色。采用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析和隨機區(qū)組設(shè)計的方差分析,多個樣本均數(shù)之間的多

4、重比較用LSD法,以P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。同時分析BALF中炎癥細(xì)胞數(shù)與IFN-γ,IL-4間相關(guān)性。
　　 結(jié)果:實驗結(jié)果表明STAT1 siRNA能減輕哮喘小鼠氣道中以嗜酸性細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤,STAT1組白細(xì)胞總數(shù),嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)以及淋巴細(xì)胞(LC)數(shù)量較另兩組少,它們之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；ELISA法分別檢測各組的肺泡灌洗液中IFN-γ,可見STAT1組高于PBS組和PG-HK組,而