SSR標(biāo)記在粳稻恢復(fù)基因Rf-1轉(zhuǎn)育、F-,1-純度和品種鑒定中的應(yīng)用.pdf

1、粳稻品種中不含有效恢復(fù)基因。粳稻恢復(fù)系是通過秈粳交，從秈稻中導(dǎo)入恢復(fù)基因而育成的?；謴?fù)基因的鑒別必須通過田間測恢來完成。利用分子標(biāo)記輔助選擇的方法選育粳稻恢復(fù)系，可以免去大量單株測交，提高恢復(fù)系的選育效率。本研究首先利用一套由六千辛A、六千辛B和8個同質(zhì)恢六千辛R株系組成的恢復(fù)基因近等基因系以及恢復(fù)基因供體77302-1和六千辛A/六千辛R的雜種F<,1>為材料，在前人的研究基礎(chǔ)上，篩選可用于恢復(fù)基因Rf-1分子標(biāo)記輔助選擇的實用SSR

2、標(biāo)記，然后通過配制測交組合，計算實用標(biāo)記擴增帶型和田間測恢的符合率加以驗證。再利用實用標(biāo)記輔助選擇將Rf-1基因?qū)氤Ｒ?guī)品種寧粳1號轉(zhuǎn)育正常胞質(zhì)的粳稻恢復(fù)系。同時還利用68個SSR引物對雜交粳稻的純度和粳稻常規(guī)品種的真實性鑒定進(jìn)行了初步的研究，主要結(jié)果如下： 1．從迄今已報道的12對與BT型粳稻恢復(fù)基因Rf-1連鎖SSR引物中篩選到位于第10條染色體上的SSR引物RM5629，在六千辛A和六千辛B中均擴增出120bp的片段，在恢

3、復(fù)基因供體77302-1和8個同質(zhì)恢六千辛R中均擴增出110bp的片段，在六千辛A/六千辛R的雜種F<,1>中擴增出110bp和120bp的互補片段，表明RM5629可作為Rf-1分子標(biāo)記輔助選擇的實用SSR標(biāo)記。 2．利用SSR標(biāo)記RM5629對9個細(xì)胞核類型的同質(zhì)恢復(fù)系68個株系和8個非同質(zhì)恢復(fù)系及紫尖武粳進(jìn)行擴增，并考查了上述材料與5個不育系測交F<,1>的田間自然結(jié)實率。結(jié)果：(1)6247R、武育粳3號R、六鹽189R

4、、六千辛R、157TR、4016R、4016LHR 7個細(xì)胞核類型的同質(zhì)恢、紫尖武粳和8個生產(chǎn)上應(yīng)用的非同質(zhì)恢復(fù)系的RM5629擴增帶型與田間測恢的恢復(fù)能力符合率達(dá)100％；17個3726R株系有16個株系的RM5629擴增帶型與田間測恢的恢復(fù)能力符合，符合率為94.1％；同質(zhì)恢復(fù)系秀水04R的RM5629擴增帶型與田間測恢的恢復(fù)能力不相符。(2)在178個測交組合中選到7個綜合性狀表現(xiàn)比較突出的雜交組合：武3A/4016LHR-70、

5、武3A/157TR-68、六千辛A/157TR-68、武羌A/C堡、武羌A/湘晴、武羌．A/6427R-16、武羌A/R254。 3．以太湖流域正在廣泛應(yīng)用的粳稻恢復(fù)系R254作為恢復(fù)基因供體，與生產(chǎn)上正在大面積推廣的抗條紋葉枯病優(yōu)良常規(guī)粳稻品種寧粳1號雜交并與寧粳1號回交。在89株BC<,1>F<,1>群體中利用引物RM5629檢測出含恢復(fù)基因帶型的39株。從中選擇農(nóng)藝性狀與寧粳1號相似的11個單株分別與寧粳1號繼續(xù)回交，已得

6、到BC<,2>F<,1>種子用于進(jìn)行下一步回交轉(zhuǎn)育。 4.利用RM5629對江蘇省大面積種植的5個粳稻雜交組合進(jìn)行純度鑒定，不育系(保持系)均擴增出120bp的片段，恢復(fù)系均擴增出110bp的片段，雜種F<,1>種均擴增出110bp和120bp兩個互補片段，RM5629可以作為這5個雜交組合F<,1>種子純度鑒定的實用標(biāo)記。但利用RM5629不能區(qū)分不同的組合。用另外的67對SSR引物對這5個組合進(jìn)行擴增，結(jié)果表明：在67對引物

7、中有14對SSR引物能在雜種F<,1>表現(xiàn)為父母本互補帶型，不同組合間多態(tài)性頻率在8.8％～11.8％之間。引物RM224可以同時區(qū)分三個不同的組合，引物RM224在常優(yōu)1號雜種F<,1>中擴增出160bp和130bp的兩條互補片段，在六優(yōu)1號和3優(yōu)18兩個組合的雜種F<,1>中均擴增出130bp和140bp的兩條互補片段，在泗優(yōu)422雜種F<,1>中擴增出145bp和160bp的兩條互補片段。 5.利用上述68對SSR引物對3