不同生境松茸菌株液體培養(yǎng)和遺傳特性的比較研究.pdf

1、松茸是與Tricholoma matsutake相近的一些口蘑屬近緣種的總稱，在分類(lèi)上均屬于擔(dān)子菌綱)Basidiomycetes)，傘菌目(Agaricales)，口蘑科(Tricholomataoeae)，口蘑屬(Tricholoma)，是世界上珍稀名貴的外生菌根菌。主要分布在亞洲地區(qū)，美洲、歐洲和北非部分地區(qū)也有生長(zhǎng)，與松屬和櫟屬植物形成共生關(guān)系。不同地區(qū)、不同宿主的松茸經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期系統(tǒng)演化，可能發(fā)生遺傳特性上的差異。目前，關(guān)于松茸的

2、研究多停留在一般分類(lèi)鑒定、人工栽培、生態(tài)管理等方面，對(duì)于世界不同分布地區(qū)、不同宿主的松茸液體培養(yǎng)和遺傳特性的研究較少。松茸這種世界公認(rèn)的名貴食用菌，尚不能人工栽培，而且野生資源正在急劇減少，因此，有必要進(jìn)一步開(kāi)展液體培養(yǎng)，研究松茸資源的遺傳背景，對(duì)提升我國(guó)特殊生物資源替代產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)利用和規(guī)?；a(chǎn)的整體技術(shù)水平、培育資源節(jié)約型生物新產(chǎn)業(yè)具有重要作用。 本試驗(yàn)以中國(guó)、日本、美國(guó)、瑞典、北非等松茸主要分布區(qū)域的不同宿主的松茸為供試菌

3、株，對(duì)菌絲生長(zhǎng)特性、酯酶同工酶特性和線粒體DNA (mtDNA) -MS序列進(jìn)行系統(tǒng)研究，篩選出適宜液體培養(yǎng)的優(yōu)良菌株并提出配套的培養(yǎng)條件，探索酯酶同工酶電泳和mtDNA-PCR擴(kuò)增的適宜條件，比較不同生境松茸菌株的遺傳差異，為松茸這種特殊生物資源的替代產(chǎn)品研發(fā)及規(guī)?；a(chǎn)奠定基礎(chǔ)，填補(bǔ)這方面研究的空白。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同分布區(qū)域、不同宿主的松茸菌株遺傳差異性很大。結(jié)果如下： (1) 按菌落形態(tài)特征不同，供試菌株分為兩類(lèi)：第一類(lèi)

4、為亞洲松茸 Tricholomamatsutake，包括以日本赤松、日本黑松、日本鐵杉、日本櫟樹(shù)和瑞典赤松為宿主的供試菌株L89-2、L89-3、91035、Old cap、Y-N-05、240625、240621、240201和Eric；第二類(lèi)為美洲松茸 T.magnivelare和北非松茸 T.caligatum，包括以美國(guó)針葉林、美國(guó)海岸松和北非雪松為宿主的菌株 Am-3、Am-20和241803。 (2) 根據(jù)液體培養(yǎng)菌

5、絲生長(zhǎng)速率的方差分析結(jié)果和菌球形成的優(yōu)良，篩選出 2個(gè)最適宜液體培養(yǎng)的供試菌株，分別為以美國(guó)海岸松和日本鐵杉為宿主的Am-20和240621。 (3)明確了液體培養(yǎng)的適宜條件：100ml蒸餾水加入葡萄糖20g、蛋白胨1g、酵母1g，pH值5.2～5.3，轉(zhuǎn)速180r/min、培養(yǎng)溫度24℃。 (4)提出了酯酶同工酶電泳的適宜條件：分離膠濃度7.0％，濃縮膠濃度2.5％，分離膠電壓200V，濃縮膠電壓140V，電泳3.5h

6、。 (5)MtDNA-PCR擴(kuò)增的適宜條件因區(qū)域不同而異。中國(guó)以赤松為宿主的5個(gè)松茸菌株P(guān)CR擴(kuò)增的適宜參數(shù)：MgCl<,2>1μl，一對(duì)MS引物各1μl；循環(huán)參數(shù)為：94℃變性30S，55℃復(fù)性30S。以日本赤松、日本黑松、日本櫟樹(shù)、美國(guó)針葉林、美國(guó)海岸松和北非雪松為宿主的7個(gè)供試菌株的PCR擴(kuò)增的適宜參數(shù)：MgCl<,2>1.5μl，一對(duì)MS引物各1.5μl；循環(huán)參數(shù)為：94℃變性50S，55℃復(fù)性50S。 (6)N

7、TSYS軟件分析酯酶同工酶電泳結(jié)果，構(gòu)建系統(tǒng)樹(shù)，將供試菌株分為三類(lèi)：第一類(lèi)，與菌落形態(tài)特征分析的結(jié)果相同；第二類(lèi)，為美洲松茸 T.magnivelare，包括以美國(guó)針葉林和美國(guó)海岸松為宿主的供試菌株Am-3和Am-20；第三類(lèi)，為北非松茸T.caligatum，僅包括以北非雪松為宿主的供試菌株241803。 (7)按照mtDNA-MS序列的分析結(jié)果，不同分布區(qū)域、不同宿主的松茸菌株遺傳背景不同：美洲的松茸有明顯的宿主差異；亞洲的