人足月胎盤間充質(zhì)干細胞體外分離純化及生物學性狀的研究.pdf

1、目的：擬從人足月胎盤分離純化出間充質(zhì)干細胞(Mecenchymal stem cells MSCs)，進行體外擴增，研究其生物學性狀，并向成脂細胞分化，尋找新的間充質(zhì)干細胞來源。方法：1、采取4種不同的消化分離方法從人足月胎盤中分離純化MSCs，胎盤組織剪碎后平均分為4組：A、胰蛋白酶+淋巴細胞分離液組；B、胰蛋白酶/膠原酶Ⅳ(1：1)+羥乙基淀粉沉淀組；C、膠原酶Ⅳ+淋巴細胞分層液分離組；D、膠原酶Ⅳ+羥乙基淀粉沉淀組，五份標本/組。

2、2、第3代細胞經(jīng)CD44抗體、CD34抗體、CD29抗體、CD106抗體免疫熒光方法鑒定；通過細胞生長曲線及電鏡觀察其生物學性狀。3、第三代細胞采用含異丁基-甲基黃嘌呤、地塞米松、胰島素的高糖DMEM誘導液向脂肪細胞誘導，油紅O染色，觀察MSCs的形態(tài)變化，未誘導組作為平行對照。結果：1、在其他條件相同的情況下，膠原酶Ⅳ+羥乙基淀粉沉淀組培養(yǎng)成功率為100％，其余3組分別為20％，60％，80％，膠原酶IV+羥乙基淀粉沉淀組細胞出現(xiàn)伸展

3、時間及原代培養(yǎng)時間均短于其他三組。2、人胎盤間充質(zhì)干細胞為貼壁生長的長梭形成纖維樣細胞，增殖能力較強；強表達透明質(zhì)酸受體CD44和整合素家族受體CD29，不表達造血干細胞標志CD34和內(nèi)皮細胞標志CD106;3、胎盤MSCs具有向脂肪細胞分化的潛能，油紅O染色結果陽性。結論：使用膠原酶Ⅳ消化胎盤組織，結合羥乙基淀粉沉淀法能較好地分離人胎盤間充質(zhì)干細胞；從人足月胎盤中成功分離出間充質(zhì)干細胞，與其他來源的間充質(zhì)干細胞生物學性狀相似，可組為組