先天性小耳殘耳軟骨中Ⅱ型膠原和彈性蛋白的表達(dá)及生物力學(xué)研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察先天性小耳畸形患者殘耳軟骨細(xì)胞基質(zhì)中Ⅱ型膠原蛋白和彈性蛋白在翻譯和轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)和生物力學(xué)的改變，探討先天性小耳畸形發(fā)生的組織學(xué)改變及其與生物力學(xué)之間的關(guān)系。 方法：選取24例Tanzer分類ⅡA型小耳患者殘耳軟骨，記作A組，并按年齡分為成人組(AA組)和兒童組(AB組)。同時(shí)取12名正常人耳郭耳甲部份的軟骨，記作B組，并分為成人組(BA組)和兒童組(BB組)。分別采用雙重染色法顯示耳軟骨中膠原和彈性纖維；采用免疫

2、組化ABC法檢測(cè)軟骨中Ⅱ型膠原和彈性蛋白在蛋白水平的表達(dá)；采用原位雜交染色法檢測(cè)軟骨中Ⅱ型膠原和彈性蛋白在mRNA水平的表達(dá)情況，并通過(guò)彩色圖像分析軟件Image-proplus5.0分別定量測(cè)量?jī)煞N纖維的面密度(AD)、免疫組化中Ⅱ型膠原和彈性蛋白的平均積分光密度(AIOD)以及原位雜交中Ⅱ型膠原和彈性蛋白的陽(yáng)性單位(PU值)，并對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。同時(shí)測(cè)試各組耳軟骨極限抗拉強(qiáng)度、應(yīng)力—應(yīng)變、應(yīng)力松弛等各項(xiàng)生物力學(xué)性能指標(biāo)，對(duì)測(cè)試

3、結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。 結(jié)果：膠原和彈性纖維雙重染色顯示B組膠原和彈性纖維粗大，排列規(guī)則，A組膠原和彈性纖維稀疏，略纖細(xì)，排列欠規(guī)則。Ⅱ型膠原蛋白免疫組化和原位雜交染色結(jié)果顯示A、B兩組表達(dá)強(qiáng)度差別不大，但A組免疫組化染色顯示在軟骨深層膠原分布不均勻。彈性蛋白免疫組化和原位雜交染色結(jié)果顯示B組表達(dá)強(qiáng)度均大于A組。彩色圖像定量分析結(jié)果顯示A、B兩組膠原纖維面密度沒有差別，但彈性纖維的面密度A組小于B組；A、B兩組Ⅱ型膠原蛋白的平

4、均積分光密度(AIOD)和PU值均沒有差別，但彈性蛋白的AIOD和PU值均顯示B組大于A組。正常組極限抗拉強(qiáng)度、應(yīng)力—應(yīng)變、應(yīng)力松弛等各項(xiàng)生物力學(xué)指標(biāo)優(yōu)于小耳組。 結(jié)論：①小耳畸形患者殘耳軟骨中彈性蛋白在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均顯著減少，Ⅱ型膠原蛋白在軟骨深部分布不均勻，這些改變可能是導(dǎo)致小耳患者發(fā)生耳郭畸形的病理學(xué)基礎(chǔ)，且彈性蛋白發(fā)生改變的環(huán)節(jié)可能在轉(zhuǎn)錄前水平； ②小耳畸形患者殘耳軟骨的生物力學(xué)降低，其原因可能與畸形軟骨中Ⅱ型