終末期肝病患者肝組織和血清中乙型肝炎病毒轉錄體的對照研究.pdf

1、目的:1996年Schutz等建立用于檢測肝組織內(nèi)HBV全長型和頓挫型轉錄體的方法;此后,Su和Zhang等于2001年建立了從血清中檢測這兩種轉錄體的方法.該研究采用上述兩種研究方法,分別選擇HBsAg陰性和HBsAg陽性的肝癌、肝硬變、其他肝病患者及非肝病患者,以及其中部分手術治療患者,收集其血清標本和手術切除的肝組織標本,提取核酸后經(jīng)PCR檢測其中XDNA、fRNA和trRNA,分析其產(chǎn)物與終末期肝病的關系.并首次對來源于同一患者

2、的血清標本和肝組織標本中的病毒轉錄體進行對照研究,進一步闡明HBV轉錄體存在的意義.方法:實驗一:病例選取該校唐都醫(yī)院和西京醫(yī)院普通外科2002/12-2003/08住院病人145(男102,女43)例,年齡8~73(平均46.85)歲;肝癌67例,肝硬化46例,其他肝病患者19例,非肝病患者13例.145例中HBsAg陽性者70例,其中HBsAg陽性/HBeAg陽性20例HBsAg陰性者75例,其中HBV免疫學完全陰性32例.血清標本

3、收集:抽取患者靜脈血 5ml,置于滅菌干燥無抗凝特制離心管內(nèi),取血后迅速于低溫離心機4 ℃,3000g,離心25min,吸取上層血清并分裝.-70℃保存?zhèn)溆?血清核酸提取及PCR:采用High pure viral nucleic acid kit提取血清核酸,終產(chǎn)物為50ul.以此核酸提取物為模板,txs+和txas-為引物,經(jīng)PCR擴增HBx DNA.應用Titan One Tube RT-PCR System,txs+/txs<,

4、2>+和txas<,5>-為引物,經(jīng)一步法擴增fRNA和trRNA.PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳顯示結果.實驗二:選取實驗一中部分手術患者49(男32,女17)例,年齡8~62(平均46.27)歲;其中肝癌16例,肝硬化25例,肝良性瘤4例,其他4例,49例中HBsAg陽性27例,其中HBsAg陽性/HBeAg陽性5例;HBsAg陰性22例,包括HBV血清學標志物完全陰性者12例.肝組織標本處理:肝組織標本手術切除后,立即置于液氮運輸,-70