“PDCD5、Bco-2蛋白在宮頸鱗癌中的表達及藍萼甲素對宮頸鱗癌SiHa細胞的作用機制探討.pdf

1、目的：研究PDCD5、Bcl-2蛋白在宮頸鱗狀細胞癌(cervical squamous cellcarcinoma，CSCC)組織中的表達及與臨床病理的關系；觀察藍萼甲素(Glaucocalyxin A)對宮頸癌SiHa細胞的作用并探討其機制。
　　 方法：收集CSCC組織標本89例及正常宮頸上皮(normal cervical epithelium，NCE)組織標本25例，采用免疫組織化學法，觀察CSCC組織及NCE組織中P

2、DCD5、Bcl-2蛋白的表達情況；四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法觀察1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的Glaucocalyxin A對SiHa細胞增殖的影響；Hoechst33258熒光染色和透射電鏡(transmission electron microscopy，TEM)觀察給藥后SiHa細胞的形態(tài)學變化；流式細胞

3、儀(flow cytometer，F(xiàn)CM)檢測給藥后SiHa細胞周期和凋亡率的變化；RT-PCR檢測給藥后SiHa細胞凋亡相關基因PDCD5、Caspase-3、Caspase-9、p53、Bcl-2、Bax mRNA表達的變化；Western blot檢測給藥后SiHa細胞凋亡相關蛋白PDCD5、Bcl-2、Bax蛋白的表達情況。
　　 結果：CSCC組織中PDCD5蛋白的陽性表達率為33.71％(30/89)低于NCE組織的

4、76％(19/25)，PDCD5蛋白的陽性表達率與有無淋巴結轉移極顯著相關(P<0.001)，與病理分級低分化和高分化顯著相關(P<0.05)。CSCC組織中Bcl-2蛋白的陽性表達率為67.42％(60/89)高于NCE組織的40％(10/25)，Bcl-2蛋白的陽性表達率與宮頸癌的浸潤深度極顯著相關(P<0.001)，與腫瘤的病理分級及有無淋巴結轉移非常顯著相關(P<0.01)。CSCC組織中Bcl-2和PDCD5蛋白表達呈負相關(

5、r=-0.427，P<0.01)；藍萼甲素對SiHa細胞有抑制增殖效應，且呈劑量及時間依賴趨勢；Hoechst33258染色后，熒光顯微鏡下見SiHa細胞的胞核致密濃染，或里碎塊狀；TEM觀察顯示SiHa細胞出現(xiàn)細胞核皺縮，染色質邊集等細胞凋亡的特征性改變；FCM檢測結果，隨著時間的延長，SiHa細胞凋亡率逐漸增加且S期細胞比例也逐漸增加；RT-PCR結果顯示Bcl-2 mRNA的表達下調，PDCD5、Caspase-3、Caspase