hTNF-α與膠原蛋白序列和MMPs底物序列融合基因原核載體的構(gòu)建及表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、廣東醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文hTNFα與膠原蛋白序列和MMPs底物序列融合基因原核載體的構(gòu)建及表達(dá)姓名：張翠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：黃迪南侯敢20070501h腫d與膠原蛋白序列和腫s底物序列融合基因原核載體的構(gòu)建及表達(dá)ConstructionofProkaryotieVectorandExpressionofFusionGenewithTNF_a，collagenandSubstrateSqueneeofMMP

2、s中文摘要【目的】1采用一種全新的思路對(duì)hTNFa(人腫癌壞死因子a)進(jìn)行重組改造，探索重組hTNFa原核細(xì)胞克隆及表達(dá)載體的構(gòu)建方法，以便能同時(shí)解決hTNFn毒副作用和腫瘤靶向性問(wèn)題2探索重組hTNFa融合蛋白在大腸桿菌^DE3中的表達(dá)及融合蛋白提取和純化的具體方案?！痉椒ā?重組pMDl8MMPIhTNF和pMDl8MMPShTNF質(zhì)粒的構(gòu)建將轉(zhuǎn)化入hTNFapGBT9重組質(zhì)粒的DH5Ⅱ菌液劃線培養(yǎng)，然后挑取白色單菌落用LB液體培養(yǎng)

3、基培養(yǎng)，將菌液送上海生工測(cè)序部測(cè)序挑選出測(cè)序正確的菌液進(jìn)行培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，以此質(zhì)粒作為模板，用Prime50設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR。將PCR德到的產(chǎn)物進(jìn)行AT克隆，然后轉(zhuǎn)化并提取重組pMDl8MMPlhTNF和pMDl8MMPShTNF質(zhì)粒2重組p(聊岫ona咿瑚1柵和pGEMcollagenMMP8hTNF原核克隆質(zhì)粒的構(gòu)建將提取的重組pMDl8MMPIhTNF和pMDl8MMP8hTNF質(zhì)粒分別用限制性內(nèi)切酶齜，和EcoRI進(jìn)行酶切，

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