大鼠肺纖維化Cathepsin B的表達(dá)及黃芪甲甙的干預(yù).pdf

1、目的：本研究通過檢測(cè)博萊霉素致大鼠肺纖維化不同時(shí)間點(diǎn)肺組織蛋白酶B (Cathepsin B，CB )的表達(dá)，探討CB在肺纖維化形成中的作用機(jī)制；通過檢測(cè)大鼠肺纖維化時(shí)細(xì)胞凋亡及CB的動(dòng)態(tài)變化，探討細(xì)胞凋亡和CB變化在肺間質(zhì)纖維化中的意義；通過檢測(cè)黃芪甲甙干預(yù)的大鼠肺纖維化CB的變化，探討黃芪甲甙對(duì)CB的影響，從而闡明黃芪甲甙治療肺間質(zhì)纖維化疾病的作用機(jī)制。 方法：清潔級(jí)健康Sprague Dawley（SD）大鼠48只，適應(yīng)性

2、飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為對(duì)照組（C 組）；模型組（B 組）；干預(yù)組（T 組）。B組按 7天、14天、28天、35天4個(gè)時(shí)間點(diǎn)分為 4個(gè)亞組，即 B7、B14、B28 、B35；T組按7天、14天、28天3個(gè)時(shí)間點(diǎn)分為T7、T14、T28。每個(gè)亞組及 C 組均為 6 只大鼠。模型組和干預(yù)組氣管內(nèi)注射博來(lái)霉素(BLM，5mg/kg)誘導(dǎo)肺纖維化，對(duì)照組在相同條件下給予生理鹽水。第二天起干預(yù)組大鼠每天經(jīng)胃管灌服0.1g/L黃芪甲甙2ml，其余兩組

3、相同條件下給予助溶劑羧甲基纖維素鈉。相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物取出肺組織，進(jìn)行病理學(xué)觀察；測(cè)定肺組織中羥脯氨酸含量；用免疫組化和RT-PCR觀察各組鼠肺組織CB蛋白及mRNA表達(dá)的水平；TUNEL檢測(cè)28天各組大鼠肺組織細(xì)胞凋亡。 結(jié)果： 1、肺組織 HE 染色、Masson 染色：對(duì)照組大鼠觀察未見明顯病變。模型組大鼠第 7 天表現(xiàn)為明顯的急性炎癥期，肺泡腔、肺間質(zhì)內(nèi)有大量的多核及單核細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有水腫和輕度出血，病變嚴(yán)重區(qū)肺

4、泡正常結(jié)構(gòu)被炎性肉芽組織破壞。14 天肺組織炎較前有所減輕，但仍有出血及水腫，成纖維細(xì)胞增多，肺間隔明顯增寬，有膠原沉積及斑片狀的纖維化改變； 28 天組，肺組織炎較前略有減輕，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，大量膠原沉積在新生的毛細(xì)血管周圍，肺泡間隔及部分肺泡腔被膠原和纖維蛋白占據(jù)，間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞逐漸向以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主過渡。模型組、干預(yù)組肺組織炎各期均明顯比對(duì)照組重，而肺纖維化僅第 14 天和第 28 天與對(duì)照組比較差異顯著。干預(yù)組與模型組病理變化有

5、同一規(guī)律，但肺組織炎、肺纖維化程度都輕于模型組。說明黃芪甲甙可以減輕肺組織炎和肺纖維化程度。 2.羥脯氨酸（HYP）含量：模型組HYP含量均高于對(duì)照組及干預(yù)組（P<0.01）, 模型組 HYP 含量隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增高，28天達(dá)到最高值；干預(yù)組 HYP 含量成低水平增高趨勢(shì)，HYP 含量均高于對(duì)照組而低于模型組（P<0.01或P<0.05）。 3.肺組織細(xì)胞凋亡變化：模型組第28天大鼠肺組織中細(xì)胞凋亡指數(shù)為(13.7

6、±3.4)％，對(duì)照組為(1.9±0.3)％和干預(yù)組(5.34±1.54)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=79.90,P<0.01)。 4.肺組織CB 和CB mRNA在肺纖維化過程中的表達(dá)（SABC 法和RT-PCR）：免疫組化以及RT-PCR結(jié)果顯示CB和CB mRNA表達(dá)在正常肺組織中表達(dá)較弱，在模型組7 d 時(shí)表達(dá)增強(qiáng)，14d進(jìn)一步增強(qiáng)，28天達(dá)到最高值，35天時(shí)較28天開始減弱，但仍強(qiáng)于正常組；干預(yù)組CB和CB mRNA表達(dá)量

7、成低水平增高趨勢(shì)，CB和CB mRNA表達(dá)量均高于對(duì)照組而低于模型組（P<0.01或P<0.05）。 結(jié)論： 1、CB在實(shí)驗(yàn)性大鼠肺纖維化發(fā)病過程中起重要作用，其過度表達(dá)可能參與了肺纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。 2、博萊霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化時(shí)引起肺組織CB表達(dá)上調(diào)，啟動(dòng)肺組織細(xì)胞凋亡程序，在肺纖維化發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。 3、黃芪甲甙可能通過抑制CB的過度表達(dá)，對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠肺纖維化具有良好的治療作