轉(zhuǎn)Cry1Ab-Ac基因抗蟲水稻及其毒蛋白對泥鰍的影響及安全性評價.pdf

1、本研究通過大田放養(yǎng)、花粉飼喂、稻桿粉作用3種方式，以成年泥鰍機體Cry1Ab/Ac蛋白含量、生長發(fā)育、生理酶活性、血常規(guī)與紅細(xì)胞核及組織學(xué)為試驗指標(biāo)，以非轉(zhuǎn)基因親本水稻明恢63（MH63）為對照，評價了轉(zhuǎn)Cry1Ab/Ac抗蟲水稻華恢1號（HH1）對泥鰍的安全性影響。試驗取得了以下研究結(jié)果：
　　一、轉(zhuǎn)Cry1Ab/Ac抗蟲水稻及泥鰍不同器官中的毒蛋白含量
　　采用雙抗體夾心ELISA方法，選用 EnvirLogix公司Cr

2、y1Ab/Ac試劑盒，分別檢測不同生長期的水稻。結(jié)果表明 HH1水稻不同器官（根、莖、葉、花、種子）良好的表達(dá)了Cry1Ab/Ac蛋白，在生長周期中呈現(xiàn)為成熟期＞揚花期＞拔節(jié)期。
　　水稻拔節(jié)、揚花和成熟時，HH1水稻田間泥鰍的鰓、腸、胃、肌肉和性腺中Cry1Ab/Ac蛋白含量均低于最低檢測值0.2ng/g。
　　二、轉(zhuǎn)Cry1Ab/Ac抗蟲水稻對泥鰍生長性能的影響
　　通過鮮重稱量，結(jié)合生物參數(shù)計算公式，統(tǒng)計結(jié)果顯示

3、，2012年HH1稻田環(huán)境對泥鰍的增重率、肥滿度、內(nèi)臟系數(shù)、肝體比和成熟系數(shù)沒有影響（P>0.05）。2013年于HH1水稻拔節(jié)期、揚花期、成熟期時，泥鰍的增重率、肥滿度、內(nèi)臟系數(shù)、肝體比、成熟系數(shù)與同期對照沒有顯著性差異（P>0.05）。
　　飼料中添加1％、5%、10%、20%、40%HH1花粉后，與同一水平對照組相比，泥鰍的增重率、肥滿度、內(nèi)臟系數(shù)、肝體比、腎體比和成熟系數(shù)沒有明顯變化（P>0.05）。
　　不同（10

4、、50、100、200 mg/L）濃度 HH1稻桿粉對泥鰍的增重率、肥滿度、內(nèi)臟系數(shù)、肝體比和成熟系數(shù)均沒有影響（P>0.05）。
　　三、轉(zhuǎn)Cry1Ab/Ac抗蟲水稻對泥鰍生理酶活性的影響
　　結(jié)合鄰苯三酚自氧化法、紫外分光光度法、CDNB比色法、福林酚法、Ellman法分別檢測了泥鰍的SOD、CAT、GST、蛋白酶和AChE活性。結(jié)果表明，2012年HH1試驗田泥鰍的肝臟SOD、CAT、GST活性與對照無顯著性差異（P>

5、0.05）。2013年不同生長期的HH1水稻對泥鰍肝臟、腎臟、鰓的SOD、CAT、GST活性均無顯著影響（P>0.05）。HH1稻田中泥鰍的胃、前腸、中腸、后腸蛋白水解酶活性與對照無明顯差異（P>0.05）。泥鰍腦、肝臟、肌肉的AChE活性沒有受到HH1水稻的影響（P>0.05）。
　　泥鰍取食1~40%HH1花粉飼料后，其肝臟的SOD、CAT、GST活性與對照相比無明顯變化（P>0.05）；胃、腸的蛋白水解酶活性與對照無顯著性差

6、異（P>0.05）；腦、肝臟、肌肉的AChE活性未受HH1花粉影響（P>0.05）。
　　經(jīng)10~200mg/L HH1稻桿粉處理后，泥鰍肝臟、腎臟的SOD、CAT、GST活性，胃、腸的蛋白水解酶活性，腦、肝臟、肌肉的AChE活性均與對照無顯著性差異（P>0.05）。
　　四、轉(zhuǎn)Cry1Ab/Ac抗蟲水稻對泥鰍血常規(guī)及紅細(xì)胞核的影響
　　應(yīng)用南京建成高鐵血紅蛋白試劑盒及血涂片法，對泥鰍的血液進行研究。結(jié)果表明，2012

7、年HH1稻田環(huán)境對泥鰍的Hb、MHb含量及紅細(xì)胞核沒有明顯負(fù)作用（P>0.05）。2013年HH1稻田中泥鰍的紅細(xì)胞微核率、核異常率、總核異常率、核外凸率、核不等縊裂率與對照無顯著性差異（P>0.05）。
　　取食1~40%HH1花粉飼料后，泥鰍的Hb、MHb含量與同一水平對照相比無明顯變化（P>0.05）。分別統(tǒng)計10%、20%、40%花粉處理組泥鰍的紅細(xì)胞，結(jié)果顯示，10~40%HH1組泥鰍的微核率、核異常率、核外凸率、核不等

8、縊裂率均與對照無顯著性差異（P>0.05）。
　　10~200mg/LHH1稻桿粉對泥鰍的Hb、MHb沒有顯著影響（P>0.05）。計數(shù)高濃度（200mg/L）組泥鰍紅細(xì)胞，結(jié)果表明，HH1組泥鰍微核率、核異常率、核外凸率、核不均等分裂率均與對照無明顯差異（P>0.05）。
　　五、轉(zhuǎn)Cry1Ab/Ac抗蟲水稻對泥鰍性腺組織的影響
　　采用石蠟切片法，觀察了2012年HH1、MH63水稻成熟時，田間泥鰍卵巢、精巢的組織