穿孔素基因突變與中國(guó)人急性淋巴細(xì)胞性白血病-淋巴瘤.pdf

1、[研究背景]
　　 穿孔素（Perforin PRFl）由T細(xì)胞，NK細(xì)胞等活性殺傷細(xì)胞分泌。其基因突變導(dǎo)致細(xì)胞毒介導(dǎo)的殺傷作用減弱，免疫系統(tǒng)清除病變細(xì)胞能力減弱，淋巴系統(tǒng)異常增生甚至發(fā)生腫瘤。目前發(fā)現(xiàn)高達(dá)60％家族性嗜血細(xì)胞綜合征（familial hemaphagocytic lymphohistiocytosis，F(xiàn)HLH）與PRF1突變相關(guān)。Clementi等發(fā)現(xiàn)PRFI基因敲除小鼠易患淋巴系統(tǒng)腫瘤，Smyth等也再次證

2、明了這一點(diǎn)。近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)再生障礙性貧血、淋巴瘤、自身免疫性淋巴增殖綜合征都與PRF1突變有關(guān)。Cannella等發(fā)現(xiàn)兒童間變大細(xì)胞淋巴瘤存在PRF1突變；Clementi等在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤病人中發(fā)現(xiàn)PRF1突變；另外Clementi曹報(bào)道一例自身免疫性淋巴系統(tǒng)增殖性疾病轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨土龅牟±瑫r(shí)有PRF1、FAS突變：并發(fā)現(xiàn)該患者兄長(zhǎng)具備同樣的基因突變，其兄發(fā)生了嗜血細(xì)胞綜合征，預(yù)示著PRF1突變單獨(dú)或協(xié)同其他基因突變或在環(huán)境因素作用

3、下，可能引發(fā)各種淋巴系統(tǒng)增殖性疾病。急性淋巴細(xì)胞性白血?。╝cute lymphoblastic leukemia ALL）/淋巴瘤是一種淋巴細(xì)胞單克隆增殖性疾病，并存在多種染色體異常、基因突變等細(xì)胞遺傳學(xué)改變，因此很可能PRF1基因突變與其有一定關(guān)系。Santoro曾研究一百例白種兒童急淋白血病，認(rèn)為與穿孔素基因突變A91V有關(guān)，但是Mehta曹研究二千余例白種兒童急淋白血病，認(rèn)為與穿孔素基因突變無(wú)關(guān).僅PRF.191V（在美國(guó)白種人

4、中約占5％）可能與BCR-ABL陽(yáng)性?xún)和绷馨籽∮幸欢P(guān)系。中國(guó)人與外國(guó)人種族不同，成人急淋白血病，淋巴瘤預(yù)后與兒童明顯不同，本文擬觀察PRF1基因突變、SNP（single nucleotide polymorphism單核苷酸多態(tài)性）與中國(guó)人急性淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤的關(guān)系。
　　 [目的]
　　 了解PRF1突變、SNP是否與中國(guó)人ALL/淋巴瘤有關(guān)。
　　 [研究對(duì)象與方法]
　　 1.研究對(duì)象

5、
　　 2006年2月-2008年12月期間從北京市道培醫(yī)院和北京大學(xué)第一附屬醫(yī)院收集的111例ALL患者，2005年10月至2010年2月武警總醫(yī)院和北大醫(yī)院住院和門(mén)診隨訪(fǎng)確診的77例淋巴瘤患者，北京大學(xué)第一附屬醫(yī)院2008年6-10月63例健康體檢人員作對(duì)照。該研究已取得北京市道培醫(yī)院、北京大學(xué)第一醫(yī)院和武警總醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò)。
　　 2.研究方法
　　 （1）基因組DNA提取
　　 病例組和對(duì)照組

6、研究對(duì)象的基因組DNA提取自外周血、指甲或頭發(fā)。
　　 （2）PRF1基因外顯子及兩旁?xún)?nèi)含子的擴(kuò)增和測(cè)序
　　 （3）Ph染色體及BCR/ABL融合基因檢測(cè)
　　 （4）免疫表型分析
　　 （5）EBER-1原位雜交
　　 [結(jié)果一]
　　 1.染色體分析和融合基因檢測(cè)的結(jié)果
　　 111例ALL中B-ALL93例，T-ALL18例。111例ALL中93例作了核型分析，32例（34

7、.4％）；有t（9；22）（q34；q11）易位，即Ph染色體陽(yáng)性，均為B-ALL。111例ALL都作了融合基因的檢查。36例融合基因陽(yáng)性，均為B-ALL。Ph染色體陽(yáng)性的32例均bcr/abl+，未作核型分析者中還有4例bcr/abl+。
　　 2.在ALL中檢測(cè)到4種新的雜合性PRF1錯(cuò)義突變。它們引起氨基酸的改變?yōu)椋篏198R、R225Q、D486G和R509K。它們都是B-ALL并伴有核型異常
　　 3.在ALL

8、中檢測(cè)到2種新的PRF1雜合性同義突變：S388S、Q540Q，它們也都是B-ALL并伴有核型異常或融合基因
　　 4.PRF1基因內(nèi)SNP rs885821、m885822、rs10999427和rs10999426的雜合率在正常人與ALL患者之間未發(fā)現(xiàn)明顯差異
　　 [結(jié)果二]
　　 1.在77例淋巴瘤中檢測(cè)到8種新的PRF1錯(cuò)義突變.
　　 在77例淋巴瘤中檢出了8種PRF1基因的錯(cuò)義點(diǎn)突變，它們引

9、起氨基酸的敵變?yōu)椋篖11P、Q164L、I125R、P188L、R 385W、L6P、A109G、F169S，前三種為純合性錯(cuò)義突變，后五種為雜合性錯(cuò)義突變。
　　 2.在77例淋巴瘤中檢測(cè)到3種新的PRF1同義突變
　　 我們還在3例淋巴瘤患者中檢出了3種PRF1同義突變，c.9 C>T（A3A）和c.216 C>A（T72T）為雙等位基因突變，c.180 A>G（P60P）為單等位基因突變。
　　 3.PRF

10、1基因內(nèi)SNP rs885821、rs885822、rs10999427和rs10999426的雜合率在正常人與淋巴瘤患者之間未發(fā)現(xiàn)明顯差異。
　　 4.對(duì)4例病人指甲、頭發(fā)分別測(cè)序，與外周血相同。
　　 5.對(duì)8例發(fā)生突變的淋巴瘤病人病理切片進(jìn)行EBER檢測(cè)，僅一例為陽(yáng)性。
　　 [結(jié)論]
　　 1.PRF1基因突變與B-ALL有關(guān)，主要發(fā)生在Ph+或有其它核型異常的B-ALL。
　　 2.PR