去乙?；敢种苿┍焖徕c對大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護作用及其相關機制研究.pdf

1、目的:
　　觀察大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注的病理形態(tài)、電生理、生化及凋亡相關指標的改變;探討去乙酰化酶抑制劑丙戊酸鈉對大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護作用及其相關機制。
　　方法:
　　1.建立大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注模型,研究去乙?；敢种苿┍焖徕c對缺血再灌注損傷大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)和視功能的保護作用。采用大鼠眼球前房加壓灌注110mmHg,持續(xù)60min的方法建立大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型。隨機分為假手術組、缺血再灌注組和丙戊酸

2、鈉治療組。于造模后立即開始給丙戊酸鈉皮下注射給藥300mg/Kg,每日2次,至造模后1天、7天取眼球行病理切片檢測,HE染色,視網(wǎng)膜電圖(ERG)的檢測、視網(wǎng)膜病理切片檢測及視網(wǎng)膜外核層計數(shù);按照上述方法,在造模后7天取各組眼球后視神經(jīng)進行視神經(jīng)軸突結構的電鏡觀察,
　　2.造模后7天,取各組大鼠眼球視網(wǎng)膜進行凋亡檢測,做視網(wǎng)膜石蠟切片,進行凋亡測(TUNEL)標記細胞凋亡;
　　3.造模后1天各組大鼠視網(wǎng)膜組織SOD、GS

3、H-Px、CAT活性及MDA含量的變化;
　　4.實時定量PCR和免疫蛋白印跡(western blot)分析大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后凋亡相關因子的mRNA及蛋白表達;
　　5.免疫蛋白印跡(western blot)分析大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后凋亡信號轉導分子的表達;
　　結果:
　　1.成功建立大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型,缺血后1天和7天HE染色形態(tài)顯示,丙戊酸鈉治療組視網(wǎng)膜形態(tài)保存較完整,缺血再灌注后

4、7天,外核層計數(shù)顯著多于缺血再灌注損傷組。缺血再灌注后7天ERG檢測表明,缺血再灌注組大鼠視功能顯著下降,而丙戊酸鈉治療組a、b波振幅明顯高于缺血再灌注組。
　　2.缺血再灌注后7天各組大鼠眼球后視神經(jīng)軸突結構電鏡結果顯示,假手術組大鼠球后視神的軸突髓鞘規(guī)則排列,而在缺血再灌注組中球后視神經(jīng)可見有髓神經(jīng)纖維數(shù)量稀少,排列不規(guī)則,并伴有明顯的軸突損害,如可見軸突的腫脹、崩解;濃縮的軸漿斑塊。在治療組,盡管濃縮的軸漿斑塊及髓鞘的層間分

5、離仍然可見,但軸突的損傷較缺血再灌注組明顯減輕。TUNEL結果發(fā)現(xiàn),缺血再灌注后7天視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層,內(nèi)、外核層出現(xiàn)大量陽性著染細胞核,而丙戊酸鈉治療組僅見散在的少量TUNEL陽性的細胞著染。
　　3.視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后1天,與缺血再灌注組比較,丙戊酸鈉治療組大鼠視網(wǎng)膜SOH-Px、CAT活性顯著增高,MDA含量明顯降低。缺血再灌注組bax、easpase-3、apaf-1表達顯著上調,而丙戊酸鈉治療組bax、caspase

6、-3、apaf-1表達上調明顯被抑制,且丙戊酸鈉的應用明顯上調了bcl-2和Hsp70的表達。
　　4.視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后1天,與缺血再灌注組比較,丙戊酸鈉治療組大鼠視網(wǎng)膜組蛋白3(Histone3)的乙酰化水平顯著升高。并且可見Akt的磷酸化水平及轉錄因子Sp1的乙酰化水平明顯上調。
　　結論:
　　1.丙戊酸鈉對缺血再灌注損傷后的大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)、功能具有保護作用。
　　2.丙戊酸鈉能夠明顯減輕缺血再灌注引