組織芯片研究OPNmRNA、OCT2mRNA及其蛋白在胃癌中的表達意義.pdf

1、世界范圍內(nèi)，胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，雖然近年其發(fā)病率有下降趨勢，但在許多國家，胃癌的發(fā)病率和死亡率仍居各類腫瘤之首位，我國情況也基本如此。診治水平的提高使早期胃癌患者的長期生存率有了很大的提高，但是進展期胃癌患者的預后仍然很差。導致大部分胃癌患者死亡的原因并不是原發(fā)灶本身，而是腫瘤產(chǎn)生的侵襲、轉(zhuǎn)移和復發(fā)。因此，需要有效的預后指標來確認那些有轉(zhuǎn)移和復發(fā)的高?；颊撸瑢λ麄冞M行有效的個性化治療，以提高生存期和生存率。 近年來的分子

2、生物學研究表明，腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一種多基因參與、多階段演進的極其復雜的生物學過程。參與這一過程的基因或分子，可大致分成五大類，即生長因子及其受體、細胞周期調(diào)節(jié)素、端粒酶、細胞粘附分子、基質(zhì)降解酶，其中包括表皮生長因子(EGF)、EGF受體、K-sam、HER-2、IL-8、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)、周期素E、p27、p53、鈣粘附素、CD44v6、基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)及其抑制劑(TIMP-1)等，這些基因或分子都可作

3、為預后指標。最近，文獻報道了一些與消化道腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移及預后相關的基因，包括RBP4、OCT2、IGF2、PFN2、KIAA1093、OPN、PCOLCE及FN等。本實驗對OPN與OCT2在胃癌中的表達及與胃癌各臨床病理指標的關系進行了研究。 骨橋蛋白(OPN)是一種具有多種功能的分泌型磷酸化糖蛋白，可由多種細胞，包括骨細胞、淋巴細胞、巨噬細胞及腫瘤細胞分泌。骨橋蛋白參與很多生理及病理過程，包括血管生成、細胞凋亡、炎癥、創(chuàng)傷愈

4、合以及腫瘤的轉(zhuǎn)移。最近，已有充分的證據(jù)表明骨橋蛋白有助于腫瘤細胞的浸潤及轉(zhuǎn)移，而且有很多研究認為腫瘤病人血液或腫瘤組織中的OPN水平能夠為估計病人的預后提供有用的臨床信息。OPN在很多腫瘤，包括肺癌、乳腺癌、食道癌、前列腺癌中的表達情況已有較多報道，然而OPN促進腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移的分子機制還不太清楚。 轉(zhuǎn)錄因子OCT2是POU域蛋白轉(zhuǎn)錄因子家族的一員，首先發(fā)現(xiàn)于B淋巴細胞中，由于它能與免疫球蛋白的啟動子及增強子上的八核苷酸序列(o

5、ctamersequence)ATGCAAAT結合而命名。OCT2通常被認為是淋巴細胞和神經(jīng)細胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子，不存在于其他類型的細胞上。2002年，Yoshitaka等在研究胃癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子機制時意外地發(fā)現(xiàn)OCT2在伴淋巴結轉(zhuǎn)移的胃癌細胞及一些浸潤于間質(zhì)中的淋巴細胞上有較強的表達，而在無淋巴結轉(zhuǎn)移的胃癌細胞上則未見表達。 組織芯片(TissueChip，TC)，又稱組織微陣列(TissueMicroarray，TMA

6、)，是一種以形態(tài)學為基礎的分子生物學新技術，它可被應用于各種檢測基因和蛋白在組織細胞中的定位情況的原位組織技術實驗，包括組織化學、免疫組織化學、免疫熒光以及原位雜交等。組織芯片使我們能在同等條件下同時快速檢測大量組織標本的形態(tài)學表達情況，因此本實驗采用組織芯片技術來進行研究。 本實驗搜集紹興市第一人民醫(yī)院1995年-2000年間的99例手術切除胃癌標本中的原發(fā)灶，并隨機選取同期25例慢性胃炎或胃潰瘍標本作為對照。實驗內(nèi)容主要包括

7、復習病歷和HE切片，由有經(jīng)驗的醫(yī)生核實臨床病理診斷，選取樣點做成組織芯片，然后分別利用原位雜交及免疫組織化學技術檢測OPN與OCT2在基因水平及蛋白水平的表達情況，最后結合實驗結果、臨床病理資料及隨訪資料進行統(tǒng)計分析。 統(tǒng)計學采用SPSS11.5軟件包，包括X2檢驗、Spearnan等級相關分析、Kaplan-Meier生存曲線分析、時-序檢驗等。P值以0.05作為顯著性檢驗標準。 原位雜交的結果表明，99例胃癌中OPN

8、mRNA及OCT2mRNA的陽性表達率分別為60.61％、64.65％;OPNmRNA的陽性率與腫瘤大小(r=0.295，P=0.003)、浸潤深度(r=0.289，P=0.004)、脈管侵犯(r=0.437，P=0.000)、淋巴結轉(zhuǎn)移(r=0.335，P=0.001)及遠處轉(zhuǎn)移(r=0.288，P=0.004)呈正相關；OCT2mRNA的陽性率也與腫瘤大小(r=0.354，P=0.000)、浸潤深度(r=0.378，P=0.000)

9、、脈管侵犯(r=0.348，P=0.000)、淋巴結轉(zhuǎn)移(r=0.297，P=0.003)及遠處轉(zhuǎn)移(r=0.253，P=0.011)呈正相關；OPNmRNA表達水平與OCT2mRNA呈正相關；OPNmRNA及OCT2mRNA陽性表達病例的平均生存時間和5年生存率均明顯低于陰性表達的病例。 免疫組化的結果表明，99例胃癌中OPN蛋白及OCT2蛋白的陽性表達率分別為60.61％、54.55％;OPN蛋白的陽性率與腫瘤大小(r=0.

10、295，P=0.003)、浸潤深度(r=0.295，P=0.003)、脈管侵犯(r=0.395，P=0.000)、淋巴結轉(zhuǎn)移(r=0.293，P=0.003)及遠處轉(zhuǎn)移(r=0.235，P=0.019)呈正相關；OCT2蛋白的陽性率也與腫瘤大小(r=0.352，P=0.000)、浸潤深度(r=0.271，P=0.007)、脈管侵犯(r=0.325，P=0.001)、淋巴結轉(zhuǎn)移(r=0.292，P=0.003)及遠處轉(zhuǎn)移(r=0.239，