健腦顆粒治療腦動脈硬化機理初探.pdf

1、目的：通過整體動物和體外細胞生物學實驗，從整體動物、組織、細胞和分子生物學的不同水平，觀察中藥健腦顆粒對腦動脈硬化的防治及對受損神經細胞的保護作用，并初步探索其作用機理。
　　 方法：
　　 1.采用高血壓合并高血脂法復制大鼠腦動脈硬化模型：以雙腎雙夾法制備腎性高血壓模型、再喂飼高脂飼料制成高血壓合并高血脂大鼠腦動脈硬化模型，觀察血壓、血脂，血漿NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1。水平等的變化，結合腦血管及腦組

2、織病理形態(tài)學檢查作為確認模型形成的綜合觀測指標。
　　 2.取上述腦動脈硬化模型大鼠，隨機分為模型對照組、陽性藥(桂利嗪)對照組及健腦顆粒治療給藥和預防給藥的大、小劑量組，另設偽手術對照組作為正常對照。造模給藥14周后，檢測并記錄各組大鼠的血壓、心率、腦血流，分別測定血清抗氧化水平(SOD、MDA、GSH-PX)、脂質水平(TC、TG、HDL-C、LDL-C)等相關指標及血漿中NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1。等的含

3、量，觀察腦指數(shù)、腦含水量的變化，同時測定腦組織中NO、ET含量及其抗氧化水平(SOD、MDA、GSH-PX)，并用原位雜交法觀察用藥后對腦神經細胞iNOS mRNA、ET-1 mRNA表達的影響，對腦血管及腦組織進行病理形態(tài)學檢查，觀測對腦血管、腦組織損傷的保護與修復作用。
　　 3.采用低糖DMEM培養(yǎng)液建立PC12細胞的低糖模型、連二亞硫酸鈉造成PC12細胞缺氧損傷模型、H2O2造成PC12細胞自由基損傷模型，分別給予健腦顆

4、粒各濃度藥液及大、中、小灌胃劑量的含藥血清進行干預，觀察各組細胞的形態(tài)學變化，測定各組上清LDH活力，并用MTT法測定細胞活力。
　　 4.采用灌胃給藥法進行小鼠急性毒性試驗，初步評價其安全性。
　　 結果：
　　 1.使用高血壓合并高血脂法成功建立大鼠腦動脈硬化模型，模型大鼠的血壓、血脂明顯升高，ET/NO、TXB2/6-Keto-PGF1。比值也明顯上升，且腦血管及腦組織病理形態(tài)學檢查與患者的臨床病理改變相仿

5、。
　　 2.整體動物實驗結果表明：健腦顆粒治療給藥和預防給藥大、小劑量組均能顯著降低腦動脈硬化大鼠的收縮壓、舒張壓和平均動脈壓，減緩心率，明顯提高模型大鼠的腦血流量；降低血漿ET/NO,TXB2/6-Keto-PGF1。比值，降低血清總膽固醇含量及LDL-C/HDL-C比值；明顯提高血清SOD和GSH-PX活力，同時降低MDA含量；能明顯降低腦指數(shù)、腦含水量及腦組織中NO、ET含量，降低腦神經細胞iNOSmRNA、ET-1 m

6、RNA的表達；對腦組織抗氧化水平也能有所改善；病理形態(tài)學檢查結果表明健腦顆粒能明顯抑制腦組織缺血性病變和腦血管動脈硬化癥狀的形成，這些可能是健腦顆粒治療腦動脈硬化癥的主要作用機理。
　　 3.體外實驗結果表明：缺糖、缺氧、自由基損傷后的PC12細胞活力下降，LDH活力明顯增高；健腦顆粒藥液及含藥血清可使細胞活力增強，LDH活力降低；形態(tài)學觀察也證實，給予健腦顆粒藥液或含藥血清能明顯減輕缺糖、缺氧、自由基損傷的PC12細胞形態(tài)學的