慢性阻塞性病急性加重期的生物標志物組群研究.pdf

1、第一部分慢性阻塞性肺病蛋白質組學相關文獻回顧
　　 目的：蛋白質組學方法用于研究細胞、活檢組織、體液中的蛋白組分，廣泛用于深入探索人類疾病機制，尋找用于診斷、治療、預后的特異性的新型生物標志物，以及研發(fā)藥物靶位等方面。本文第一部分研究意在通過回顧以往慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)的蛋白質組學報道，從中總結已有的候選生物標志物。
　　 方法：利用文獻檢

2、索，回顧以往基于蛋白質組學方法的COPD報道。歸納總結這些報道涉及的研究對象、研究方法、候選生物標志物等內容。同時比較部分候選生物標志物在其他慢性肺部疾病的變化。
　　 結果：通過文獻檢索，得到符合納入標準的文獻共8篇。所涉及的研究對象，除COPD外，還包括正常非吸煙人群，健康吸煙者，α1胰蛋白酶缺陷者，支氣管哮喘，肺囊性纖維化，特發(fā)性肺間質纖維化，支氣管擴張等。所選用的研究標本來源于肺組織活檢標本，支氣管肺泡灌洗液，痰液或血液

3、。使用的蛋白質組學實驗手段包括雙向電泳，反向高效液相色譜，串聯(lián)質譜法，基質輔助激光解離質譜法，表面增強激光解吸電離質譜法等。在不同標本中發(fā)現(xiàn)的大量候選生物標志物可歸屬于氧化-抗氧化系統(tǒng)，蛋白酶-抗蛋白酶系統(tǒng)，炎癥介質以及肺部特異性蛋白等。
　　 結論：單一蛋白難以作為生物標志物，而由多個蛋白組成的生物標志物組群則可更好的反映復雜疾病的狀態(tài)。蛋白質組學在COPD研究中，特別是挖掘生物標志物方面獨具優(yōu)勢，但仍需建立標準化體系，規(guī)范組

4、學研究，并最大限度的聯(lián)系臨床資料；利用生物信息學工具將臨床資料和蛋白質組學結果相聯(lián)系，以期建立數(shù)字化模式監(jiān)測COPD的進程和預后。
　　 第二部分 COPD及急性加重期病例血漿炎性生物標志物組群的定性研究
　　 目的：COPD不斷增長的死亡率與癥狀急性加重(chronic obstructive pulmonarydisease in acute exacerbatioins，AECOPD)的頻率和嚴重程度有關。系統(tǒng)性炎

5、癥在COPD/AECOPD中發(fā)揮重要作用。在第一部分研究中發(fā)現(xiàn)，目前蛋白質組學中存在的問題之一是如何將組學的結果與臨床信息相結合。因而本文第二部分研究意在通過蛋白質組學方法檢測多種炎性介質，并利用新方法將組學結果和臨床信息結合，以期從新角度發(fā)現(xiàn)候選生物標志物組群。
　　 方法：收集健康正常人、COPD以及AECOPD患者的血液標本，利用抗體芯片，定性檢測507個血漿炎癥因子。設計一套用于評價COPD及AECOPD病例病情的臨床評

6、分系統(tǒng)(DESS)，包括主要癥狀、體征、實驗室檢查等臨床信息，用于評估患者疾病的嚴重程度。將芯片檢測的差異蛋白與DESS評分結合進行相關性分析。
　　 結果：20個炎癥因子在3組人群間存在顯著差異(p<0.05)。其中Cerberus1，Growth Hormone R，IL-1F6，IL-17B R，IL-17D，IL-19，Lymphotoxinβ，MMP-10，Thrombopoietin和TLR4與患者DESS評分相關(

7、p<0.05)。在AECOPD患者中存在系統(tǒng)性炎癥的下調反應。
　　 結論：20個炎癥因子可能組成檢測COPD/AECOPD的候選生物標志物組群。將臨床信息量化并與組學結果結合的方法，為篩選疾病特異性和疾病階段特異性的生物標志物提供了新的研究模式。
　　 第三部分 COPD及急性加重期病例血漿趨化因子組群動態(tài)變化的研究
　　 目的：第三部分意在利用蛋白質組學方法定量檢測COPD/AECOPD循環(huán)中趨化因子的動態(tài)變

8、化。并繼續(xù)使用第二部分中的評分系統(tǒng)，對AECOPD患者進行動態(tài)評分，以期發(fā)現(xiàn)與AECOPD病程進展相關的候選生物標志物組群。
　　 方法：收集健康正常人、COPD以及AECOPD患者的血液標本。AECOPD患者分別在確診時、治療中及癥狀好轉后采集血液標本。利用多重趨化因子抗體芯片，定量檢測血漿中40個趨化因子。將芯片檢測的差異蛋白與DESS評分結合進行相關性分析。
　　 結果：在40個趨化因子中，30個在COPD和健康正

9、常人間存在統(tǒng)計學差異(p<0.05)，16個在AECOPD和健康正常人間存在統(tǒng)計學差異(p<0.05)。13個趨化因子，包括BTC，IL-9，IL-18Bpa，CCL22，CCL23，CCL25，CCL28，CTACK，LIGHT，MSPa，MCP-3，MCP-4和OPN，在三組間均存在差異。部分趨化因子的表達量與DESS評分間存在關聯(lián)(p<0.05)。
　　 結論：13個趨化因子可能組成監(jiān)測AECOPD發(fā)生和治療進展的候選生物