2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景及目的
   肌腱病在運(yùn)動醫(yī)學(xué)領(lǐng)域比較常見,普遍認(rèn)為各種不恰當(dāng)運(yùn)動致肌腱過度重復(fù)使用,肌腱出現(xiàn)微小的撕裂損傷,造成肌腱組織逐漸變性和退變,但其發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn):人肌腱細(xì)胞在體外牽伸載荷條件下產(chǎn)生的前列腺素E2(ProstaglandinE2,PGE2)明顯增高,過度運(yùn)動鍛煉后肌腱腱鞘周圍PGE2水平也明顯增加,提示過度的機(jī)械載荷下肌腱細(xì)胞和其周圍結(jié)締組織產(chǎn)生的PGE2有可能在肌腱病發(fā)生發(fā)展過程中起著

2、重要作用。
   正常肌腱組織富含膠原蛋白,主要是Ⅰ型膠原,以及少量的Ⅲ型膠原,肌腱病組織主要是膠原基質(zhì)發(fā)生了改變,膠原纖維束連續(xù)性中斷,結(jié)構(gòu)松散、裂隙。退行性病變肌腱及負(fù)荷大的肌腱止點(diǎn)處Ⅲ型膠原增多,肌腱病的動物模型的在體研究發(fā)現(xiàn)肌腱的膠原總量有顯著降低,Ⅲ型膠原增高,在體外培養(yǎng)條件下肌腱細(xì)胞隨傳代次數(shù)的增加,肌腱增殖能力有較大降低,Ⅰ型膠原分泌減少,Ⅰ/Ⅲ型膠原比例倒置。在各種造成肌腱損傷因素下,肌腱膠原基質(zhì)發(fā)生重塑,膠原類

3、型發(fā)生轉(zhuǎn)變,并逐漸積累基質(zhì)惡化。
   PGE2是否能導(dǎo)致肌腱細(xì)胞、胞外膠原基質(zhì)和生物力學(xué)的改變尚缺乏直接證據(jù)。為此,我們從肌腱病組織臨床病理學(xué)研究著手,觀察肌腱病組織病理學(xué)特征,分析外源性PGE2對肌腱細(xì)胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白分泌的影響,探明對肌腱組織中膠原類型、膠原含量及生物力學(xué)等影響,初步探討PGE2與肌腱病之間的關(guān)系。
   方法:
   1.人肌腱病組織的組織病理學(xué)觀察
   臨床收集肌腱病手

4、術(shù)治療中切除的病變肌腱組織和因外傷、截肢等手術(shù)中廢棄的正常肌腱組織,H-E染色比較觀察肌腱細(xì)胞結(jié)構(gòu)、肌腱基質(zhì)形態(tài),苦味酸-天狼星紅染色在偏光顯微鏡下比較觀察肌腱膠原基質(zhì)變化,分析膠原含量和膠原類型的變化。
   2.不同劑量外源性PGE2對體外人肌腱細(xì)胞增殖及胞外基質(zhì)膠原的影響
   使用組織塊法和酶消化法分離人肌腱原代細(xì)胞,進(jìn)行培養(yǎng)與傳代,鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),Ⅰ、Ⅲ型膠原免疫熒光染色法鑒定肌腱細(xì)胞;將肌腱細(xì)胞按1×104

5、數(shù)量級接種96孔培養(yǎng)皿中,分別加入不同劑量PGE2共培養(yǎng)12h、24h、48h,應(yīng)用[3H]-TdR摻入法通過閃爍計數(shù)測量肌腱細(xì)胞的增殖情況;應(yīng)用Ⅰ、Ⅲ型膠原酶聯(lián)免疫檢測不同劑量PGE2作用肌腱細(xì)胞后培養(yǎng)液中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白分泌量。
   3.外源性的PGE2對兔跟腱膠原含量、比例及生物力學(xué)特性的影響
   將健康日本短耳兔根據(jù)PGE2注射劑量的不同隨機(jī)分兩組,即50ng組和500ng組,每組動物隨機(jī)選擇一側(cè)后肢跟腱作為

6、實驗側(cè),對應(yīng)的另一側(cè)為對照側(cè),實驗側(cè)跟腱注射PGE2,對照側(cè)跟腱注射等量生理鹽水,注射方式為經(jīng)皮注射,注射部位為跟腱中部,注射量為0.2ml,每周注射一次,4周和8周后分別處死兩組實驗動物,收獲兔跟腱標(biāo)本,觀察大體情況,取標(biāo)本進(jìn)行固定包埋切片H-E染色,鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)、基質(zhì)形態(tài),天狼星紅染色在偏光顯微鏡下觀察組織中膠原成分的變化并應(yīng)用圖像分析軟件定量分析Ⅰ、Ⅲ型膠原含量,制備電鏡標(biāo)本在透射電鏡下觀測膠原纖維的密度和纖維直徑的變化。另取

7、注射8周后標(biāo)本,應(yīng)用微機(jī)控制電子萬能測試機(jī)對跟腱進(jìn)行力學(xué)測試,比較實驗側(cè)和對照側(cè)跟腱的最大載荷、抗拉強(qiáng)度的變化,比較高、低劑量兩組實驗側(cè)跟腱的最大載荷、抗拉強(qiáng)度的變化。
   結(jié)果:
   1.與正常肌腱組織比較,肌腱病組織HE染色顯示肌腱組織膠原纖維排列紊亂,結(jié)構(gòu)明顯破壞,天狼星紅組織染色示肌腱組織中黃紅色的Ⅰ型膠原纖維明顯減少,綠黑色的Ⅲ型膠原纖維明顯增多,整個膠原基質(zhì)排列雜亂無章,失去正常肌腱組織結(jié)構(gòu)。
  

8、 2.兩種方法均能分離培養(yǎng)出人原代肌腱細(xì)胞,且傳代培養(yǎng)生長良好。加入PGE2培養(yǎng)48h時,小劑量的PGE2能促進(jìn)細(xì)胞增殖(P<0.05),培養(yǎng)24h和12h時,小劑量PGE2對肌腱細(xì)胞增殖影響不明顯(P>0.05);隨著PGE2劑量增大,能抑制肌腱細(xì)胞增殖(P<0.05)。應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中膠原蛋白分泌情況顯示,不同劑量PGE2作用下肌腱細(xì)胞Ⅰ型膠原的分泌增加不明顯(P>0.05),Ⅲ型膠原分泌增加明顯(P<0.05)

9、,ColⅢ/ColⅠ的比值增大(P<0.05)。
   3.PGE2注射實驗側(cè)跟腱出現(xiàn)同人肌腱病組織類似的表現(xiàn),即不同程度表面血管化,與腱鞘粘連,彈性差,局部呈灰黃色。與對照側(cè)比較,HE染色顯示兩組實驗側(cè)跟腱組織中膠原纖維的結(jié)構(gòu)均破壞,凌亂、松弛、欠規(guī)整、纖維斷裂;天狼星紅-苦味酸染色顯示實驗側(cè)Ⅲ型膠原纖維大量增加,排列紊亂,Ⅰ型膠原明顯減少,膠原纖維明顯變細(xì),定量分析顯示實驗側(cè)肌腱內(nèi)Ⅰ型膠原含量明顯低于對照側(cè)(P<0.05),

10、Ⅲ型膠原含量顯著高于對照側(cè)(P<0.05),Ⅲ型/Ⅰ型高于對照側(cè)(P<0.05)。高劑量組與低劑量組對比發(fā)現(xiàn):兩組對照側(cè)無明顯差異,高劑量組實驗側(cè)Ⅲ型膠原纖維增加,Ⅰ型膠原纖維減少,Ⅲ型/Ⅰ型的比值增高(P<0.05)。注射8周與4周對比發(fā)現(xiàn),兩組8周實驗側(cè)Ⅰ、Ⅲ型膠原的含量均有變化,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。電鏡下觀察,實驗側(cè)肌腱單位面積內(nèi)膠原纖維密度降低,直徑粗大的纖維比例降低,直徑細(xì)小的纖維比例增加(P<0.05);兩組實驗

11、側(cè)對比發(fā)現(xiàn),高劑量組膠原纖維密度和直徑粗大纖維比例更低,直徑細(xì)小纖維比例更高(P<0.05)。力學(xué)實驗結(jié)果示:8周后兩組中實驗側(cè)跟腱最大載荷和抗拉強(qiáng)度均較對照側(cè)降低(P<0.05),高劑量組與低劑量組對比發(fā)現(xiàn):實驗側(cè)跟腱最大載荷和抗拉強(qiáng)度降低(P<0.05)。
   結(jié)論:
   1.肌腱病組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)人肌腱膠原基質(zhì)發(fā)生了明顯變化,膠原基質(zhì)退變、變性,纖維結(jié)構(gòu)破壞;膠原的類型發(fā)生變化,即Ⅰ型膠原減少,Ⅲ型膠原增多;

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