急性壞死性胰腺炎中TLR4與NF-κB關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：急性壞死性胰腺炎(Acute necrotizing pancreatitis，ANP)是一種常見的急重癥，發(fā)病率、死亡率高。經(jīng)研究證實(shí)多種細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6 等活化與急性胰腺炎(Acute pancreatitis，AP)的發(fā)生進(jìn)展關(guān)系密切。而Toll 樣受體4(Toll-like receptor 4，TLR4)、核因子-κB(Nuclear factor-kappaB，NF-κB)與這些細(xì)胞因子的

2、活化密切相關(guān)。它們?cè)贏P 發(fā)生發(fā)展中作為介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的樞紐起著重要作用。以往認(rèn)為TLR4 與NF-κB 是上下游關(guān)系：即TLR4 觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而激活NF-κB，調(diào)控大量細(xì)胞因子釋放，介導(dǎo)炎性反應(yīng)。目前認(rèn)為能激活NF-κB 的除了TLR4 調(diào)控的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路外還有TNF-α、IL-1 調(diào)控的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，且對(duì)TLR4/NF-κB 信號(hào)通路具體的傳導(dǎo)路徑又有了新的認(rèn)識(shí)。因此有必要重新認(rèn)識(shí)TLR4 與NF-κB 之間的關(guān)系。

3、 研究目的：觀察ANP 大鼠胰腺組織中TLR4 的表達(dá)情況；并且應(yīng)用NF-κB 活化抑制劑四氫化吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)進(jìn)行干預(yù)，觀察阻斷NF-κB 以后，TLR4 在ANP大鼠胰腺組織中表達(dá)的變化，探討ANP 中TLR4 與NF-κB 的關(guān)系及NF-κB 的活性對(duì)TLR4 表達(dá)的影響。 研究方法： 1）雄性SD 大鼠72 只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(24

4、只)、ANP組（24 只）、PDTC 預(yù)處理組（24 只）三組。胰管內(nèi)注入5％?；悄懰徕c建立大鼠ANP 模型；PDTC 預(yù)處理組在建立ANP 模型前1h，100mg/kg腹腔注射PDTC。H&E 染色及透射電鏡觀察胰腺組織病理學(xué)改變；酶動(dòng)力化學(xué)法檢測(cè)血清淀粉酶（AMS）和乳酸脫氫酶（LDH）；ELISA 法檢測(cè)血清TNF-α、IL-1β、IL-6；RT-PCR 法檢測(cè)胰腺組織TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表達(dá)；免疫組化及W

5、estern blot 法檢測(cè)胰腺組織TLR4 和NF-κB 蛋白表達(dá)。 研究結(jié)果： 1）同假手術(shù)組相比，ANP 組大鼠胰腺組織光鏡下有明顯出血、腺泡壞死和炎癥浸潤；電鏡下大鼠腺泡細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張、酶原顆粒明顯減少、線粒體明顯腫脹；血清AMS 和LDH 含量增加（P<0.05）；血清TNF-α、IL-1β、IL-6 含量增加（P<0.05）；胰腺組織TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表達(dá)增加（P<0.05

6、）；胰腺組織TLR4 和NF-κB表達(dá)增加（P<0.05）。 2）同ANP 組大鼠相比，PDTC 預(yù)處理組大鼠胰腺組織出血、腺泡壞死和炎癥浸潤程度明顯減輕；電鏡下胰腺組織病理學(xué)改變明顯減輕；血清AMS 和LDH 含量，TNF-α、IL-1β、IL-6 含量明顯減少（P<0.05）；胰腺組織TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA 表達(dá)，TLR4和NF-κB 表達(dá)明顯減少（P<0.05）。 主要結(jié)論及意義： 1）T

7、LR4 和NF-κB 在ANP 大鼠胰腺組織中的表達(dá)水平明顯增高，提示TLR4 和NF-κB在ANP 的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 2）PDTC 抑制ANP 大鼠胰腺組織中NF-κB 表達(dá)的同時(shí)，下調(diào)TLR4 蛋白水平表達(dá)和細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6 表達(dá)，提示PDTC 對(duì)ANP有治療作用；PDTC 能顯著降低ANP 嚴(yán)重程度的機(jī)制可能不僅是抑制了NF-κB，還可能是由于存在其它調(diào)節(jié)機(jī)制。 3）在ANP 發(fā)生發(fā)