海參腸道產(chǎn)蛋白酶菌的分離鑒定及其在海參下腳料中的應(yīng)用.pdf

1、QngdaoAgnculturalUniversityTheThesisofProfessionalMasterIsolationandIdentificationofaProteaseProducingBacteriafromTractofApostichopusjaponicasandtheStudyofItsUtilizationinSeaCucumberLeftoversGraduatewithProfessionalMaste

2、rDegree：Mentor：PiaoMeiziSecondMentor：LuanHongjieTypeofProfessionalDegree：MasterofEngineeringAcademicfield：FoodEngineering海參腸道產(chǎn)蛋白酶菌的分離鑒定及其在海參下腳料中的應(yīng)用摘要本論文通過透明圈法和酶活性測定，從刺參(Apostichopusjaponicus)胃腸道中篩選獲得一株產(chǎn)蛋白酶活性菌株，命名為QD心1，結(jié)合

3、生理生化特征與16SrRNA序列分析法，對該茵進(jìn)行鑒定。研究了菌株的最適發(fā)酵條件，考察了碳源、氮源、發(fā)酵時間、培養(yǎng)溫度、起始pH值等因素對菌株產(chǎn)蛋白酶的影響。將該菌株應(yīng)用于發(fā)酵海參下腳料——海參腸，以肽含量為指標(biāo)探究了菌株發(fā)酵海參腸的最佳條件，并對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行了活性測定。把利用QDI正1菌株發(fā)酵海參腸所得的發(fā)酵液應(yīng)用于多肽口服液的調(diào)制，得到一種風(fēng)味獨特，營養(yǎng)豐富的海參腸口服液。具體結(jié)果如下：1菌種篩選及鑒定將分離得到的產(chǎn)蛋白酶茵命名為Q

4、Dm1，該菌株為革蘭氏陽性菌，桿狀，兩端鈍圓，有茅孢。菌落為乳白色、圓形、凸起、邊緣整齊濕潤的光滑型小茵落。16SrRNA全序列分析顯示QD旺1全序列由1450bp組成，QD研l(wèi)與ThalassobacillusspLYl8的同源性為993％，屬于細(xì)菌，厚壁茵門，桿菌綱，芽孢桿菌目，芽孢桿菌科，Thalassobacillus屬。2產(chǎn)酶發(fā)酵條件優(yōu)化經(jīng)單因素和正交試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：ThalassobacillusspQDHF1菌株在添加糖類為

5、碳源的培養(yǎng)基上會產(chǎn)酸抑制菌株產(chǎn)酶：因此，當(dāng)在不添加糖類的培養(yǎng)基上，以酵母膏為碳源，蛋白胨為氮源，培養(yǎng)基初始pH值80，培養(yǎng)溫度30℃的條件下振蕩培養(yǎng)72h，所產(chǎn)蛋白酶活力最高，酶活力為763U／mL。3海參下腳料發(fā)酵將菌株ThalassobacillusspQDIIr一1應(yīng)用于發(fā)酵海參下腳料得到海參下腳料發(fā)酵液，對不同濃度下發(fā)酵液清除DPPH自由基、羥自由基和超氧陰離子自由基的活性進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，海參下腳料發(fā)酵產(chǎn)物對3種自由基均有清除作用