采用巢式PCR與低親和力試驗(yàn)檢測(cè)梅毒早期感染的研究.pdf

1、南華大學(xué)碩士學(xué)位論文采用巢式PCR與低親和力試驗(yàn)檢測(cè)梅毒早期感染的研究姓名：黃澍杰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)指導(dǎo)教師：甘潤(rùn)良200705015中文摘要中文摘要梅毒（Syphilis）是危害性很大的性傳播性疾?。⊿TD）。監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)現(xiàn)階段梅毒發(fā)病率持續(xù)增高，防治形勢(shì)嚴(yán)峻，同時(shí)，梅毒患者容易感染或傳播艾滋病(AIDS)。因此，早期診斷并及時(shí)治療對(duì)梅毒預(yù)防控制至關(guān)重要。本研究期望通過建立巢式PCR技術(shù)及運(yùn)用改良ELISA、改良蛋白

2、印跡技術(shù)對(duì)血清中特異性TpIgG抗體親和力檢測(cè)來區(qū)分梅毒早期或晚期感染。根據(jù)TPpolA基因序列，初步建立巢式PCR技術(shù)，對(duì)比DF、TRUST、TPPA、TPIgMELISA、TPIgGELISA等檢測(cè)法對(duì)31例確診為一期梅毒的皮損組織液、血清進(jìn)行平行檢測(cè)；通過改良ELISA技術(shù)和改良蛋白印跡（WB）技術(shù)，對(duì)15例確診為一期梅毒和21例潛伏(latent)梅毒的患者血清進(jìn)行TPIgG抗體親和力檢測(cè)。結(jié)果顯示：巢式PCR在檢測(cè)TP標(biāo)準(zhǔn)株和

3、對(duì)照菌株時(shí)具有高度的特異性，只擴(kuò)增TP標(biāo)準(zhǔn)株，并能檢測(cè)到1個(gè)ul的TP菌液濃度。應(yīng)用該巢式PCR檢測(cè)上述31例一期梅毒硬下疳組織液，陽(yáng)性率達(dá)90.32%，高于暗視野檢查（DarkfieldDF）結(jié)果54.84%，差異有顯著性（χ2=8.10，P〈0.005），略高于TPPA結(jié)果87.1%，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。應(yīng)用該巢式PCR檢測(cè)血清中TPDNA的陽(yáng)性率為12.90%（431），明顯低于組織液巢式PCR和其它常規(guī)方法（TRUST陽(yáng)性率為74.

4、19%、TPIgMELISA陽(yáng)性率為61.29%，TPIgGELISA陽(yáng)性率為74.19%），可能與一期梅毒血清中TP含量低有關(guān)，說明一期梅毒血清不能作為理想的標(biāo)本用于TPDNA檢測(cè)。與TPPA比較，DF、TPIgM陽(yáng)性率較低，差異有顯著性。而TPIgM與TPIgG陽(yáng)性率比較差異無顯著性(χ2=0.66P=0.42＞0.05)。改良ELISA法結(jié)果顯示，經(jīng)變性劑8M尿素溶液處理過的樣本，15例一期梅毒樣本中，7例吸光度出現(xiàn)下降，8例則反

5、而有所增加；21例潛伏梅毒只有6例出現(xiàn)下降，15例增加，說明這種方法不宜用作TP抗體親和力試驗(yàn)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。改良WB結(jié)果顯示，在15例一期梅毒樣本中，有14例產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，8M尿素處理試驗(yàn)后，15、17、45、47kDa等4條抗原區(qū)帶的顏色強(qiáng)度都出現(xiàn)明顯下降，經(jīng)wilcoxon檢驗(yàn)，均有顯著性差異。而在對(duì)照組21例潛伏梅毒樣本的常規(guī)WB試驗(yàn)和親和力試驗(yàn)，所得到的數(shù)據(jù)經(jīng)wilcoxon檢驗(yàn)，4條抗原帶顏色強(qiáng)度的降低也出現(xiàn)相同的顯著性差