炎癥性腸病患者差異表達(dá)蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、目的:應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)尋找炎癥性腸病患者血漿和腸粘膜組織差異表達(dá)蛋白。 方法:采用CM10芯片對24例潰瘍性結(jié)腸炎、25例克羅恩病和25例正常對照者血漿進(jìn)行分析，從蛋白表達(dá)圖譜中發(fā)現(xiàn)差異蛋白，建立區(qū)分克羅恩病和正常對照、潰瘍性結(jié)腸炎和正常對照、潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病以及炎癥性腸病和正常對照的決策樹分析模型，并進(jìn)行盲法篩選。 應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)分析5對克羅恩病病灶、病灶旁組織及5例粘膜輕度炎癥組織，篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì)，

2、并用MALDI-TOF-MS串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行鑒定分析。 結(jié)果:在質(zhì)荷比2000-30000的范圍內(nèi)，克羅恩病和正常對照之間、潰瘍性結(jié)腸炎和正常對照之間以及炎癥性腸病和正常對照之間具有2倍以上差異的血漿蛋白峰數(shù)分別為9個(gè)、5個(gè)和11個(gè)，軟件自動選取m/z為8208、8837的蛋白質(zhì)建立區(qū)分克羅恩病和正常對照的決策樹模型，m/z為6985的蛋白質(zhì)建立區(qū)分潰瘍性結(jié)腸炎和正常對照的決策樹模型及m/z為8208、1752、28840和17

3、02四個(gè)蛋白質(zhì)建立炎癥性腸病和正常對照的決策樹模型，3個(gè)決策樹分析模型的靈敏度分別為96％、82％和91％，特異性分別為100％、85％和100％。 運(yùn)用雙向凝膠電泳技術(shù)，共篩選出克羅恩病和正常對照粘膜組織差異表達(dá)蛋白22個(gè)，其中1個(gè)蛋白質(zhì)在克羅恩病患者中表達(dá)上調(diào)并具有4倍以上差異，21個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào)。在這21個(gè)蛋白質(zhì)中，3個(gè)表達(dá)差異在4倍以上，18個(gè)表達(dá)差異在2倍以上4倍以下。通過質(zhì)譜技術(shù)共鑒定出13個(gè)蛋白，分別為熱休克蛋白

4、70、膜連蛋白A1、膜連蛋白A2、白蛋白類、二硫鍵異構(gòu)酶、乙醛脫氫酶、帶有苯甲基谷胱甘肽抑制劑的乙二醛酶A鏈、角蛋白8和角蛋白19。 結(jié)論:用SELDI-TOF-MS篩選的血漿克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎的差異表達(dá)蛋白質(zhì)中，m/z 8208對于克羅恩病篩選價(jià)值高，特異性較好，值得進(jìn)一步探索。 雙向凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜分析的方法篩選到克羅恩病結(jié)腸粘膜13個(gè)差異表達(dá)蛋白，可能與克羅恩病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，它們在克羅恩病中的作用有待進(jìn)一步