用于三維培養(yǎng)氣道平滑肌細(xì)胞的多孔支架材料的制備與表征研究.pdf

1、三維高分子支架的孔隙結(jié)構(gòu)在組織工程中扮演著重要的角色，因?yàn)樗鼮榧?xì)胞提供重要的骨架結(jié)構(gòu)，使種植的細(xì)胞生長成為有功能性的組織。本課題采用冷凍干燥法（相分離法）制備了殼聚糖-明膠三維多孔支架材料。在本課題中，利用冰晶微粒作為制孔劑，通過不同的濃度和預(yù)凍溫度來獲得不同孔隙度和孔徑的多孔支架。在研究支架的結(jié)構(gòu)時(shí)，通過掃描電鏡圖像觀察到，當(dāng)材料濃度越低(1wt％)預(yù)凍溫度越高（-20℃）時(shí)，形成支架的孔徑最大，為60-100μm；而當(dāng)支架孔隙度最大

2、，為93％時(shí)，支架確是在預(yù)凍溫度為-196℃，濃度為1wt％時(shí)形成的。
　　 同時(shí)還考察了殼聚糖-明膠支架的密度、吸水性、體外降解性。發(fā)現(xiàn)支架的密度隨著殼聚糖-明膠混合物濃度的增大而增大；支架的濃度越低，預(yù)凍溫度越高，吸水性越好；支架的濃度越小，預(yù)凍溫度越低，越易降解。
　　 本課題還建立了分離和體外培養(yǎng)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞的方法，通過組織貼塊法獲得的大鼠氣道平滑肌細(xì)胞生長狀態(tài)和形態(tài)良好，七代以內(nèi)可作為種子細(xì)胞使用。

3、>　　 將原代培養(yǎng)氣道平滑肌細(xì)胞（airway smooth muscle cell，ASMC）第4代，接種于殼聚糖-明膠是三維支架中，通過MTT法發(fā)現(xiàn)平滑肌細(xì)胞的增殖情況良好，同時(shí)發(fā)現(xiàn)支架的孔隙度對細(xì)胞的增殖有顯著的影響，即支架的孔隙度越大，細(xì)胞的增殖情況越好。通過掃描電鏡以及免疫熒光染色觀察到細(xì)胞在支架上的生長狀態(tài)良好。
　　 研究表明冷凍干燥法可以作為一種備用方法來構(gòu)建三維多孔支架。本研究構(gòu)建的高度交聯(lián)的具有一定功能的殼