水牛胚胎分割的初步研究.pdf

1、本研究主要探討水牛桑椹胚去致密化、分割液、分割方法和胚胎發(fā)育時期對胚胎分割效果的影響及取樣胚冷凍的可行性。借助顯微操作儀，將體外受精的水牛桑椹胚(第5d)和囊胚(第6～7d)分割，體外培養(yǎng)半胚，觀察其發(fā)育情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1)水牛桑椹胚經(jīng)去致密化處理分割，其分割成功率(68.0％VS 50.6％)和囊胚發(fā)育率(57.9％VS 41.0％)均顯著高于未處理組(P<0.01)，囊胚細胞數(shù)差異不顯著(P>0.05)；2)在PBS+0.2 M S

2、組與PBS+5％PVP組中分割桑椹胚，其分割成功率顯著高于PBS組(71.67％、67.26％VS 55.44％)(P<0.05)，而半胚的囊胚發(fā)育率及囊胚細胞數(shù)三者均無差異顯著性(P>0.05)；在PBS+0.2 M S與PBS+5％PVP中分割囊胚，其分割成功率顯著高于 PBS(79.13％、76.73％VS 65.25％)(P<13.05)，而半胚培養(yǎng)的囊胚發(fā)育率及囊胚細胞數(shù)三者差異均無顯著性(P>0.05)；3)用直接分割法和單

3、臂分割法分別分割桑椹胚和囊胚，其分割成功率(70.76％VS 71.49％，79.02％VS 80.77％)、囊胚發(fā)育率(57.27％vs57.60％，67.26％VS 68.94％)和囊胚細胞數(shù)三者均無顯著差異性(P>0.05)；4)早期囊胚的分割成功率顯著高于桑椹胚和擴展囊胚的(84.17％VS 72.96％、76.06％)(P<0.05)，囊胚發(fā)育率也顯著高于桑椹胚(74.99％VS 58.31％)(P<0.05)，也稍高于擴展囊

4、胚的(74.99％VS 68.83％)(P>0.05)。而三者的囊胚細胞數(shù)差異不顯著(P>0.05)；5)取樣胚和整胚冷凍.解凍后的存活率(34.9％VS 66.7％)和孵化囊胚率(13.9％VS 29.4％)均差異極顯著(P<0.01)。結(jié)果表明：1)水牛桑椹胚去致密化有利于分割后胚胎的成活和發(fā)育；2)在PBS中分別添加0.2 M 的蔗糖和5％的PVP有利于提高水牛桑椹胚和囊胚的分割成功率；3)直接分割法和單臂分割法均適合于水牛桑椹胚