茯苓種質(zhì)資源多樣性與代料栽培技術(shù)初步研究.pdf

1、本文采用酯酶同工酶和ISSR分子標記技術(shù)，對我國茯苓栽培菌株及部分野生菌株的遺傳多樣性進行了分析，并開展了茯苓代料栽培技術(shù)的研究。主要研究結(jié)果如下： 對茯苓27個供試菌株進行酯酶同工酶分析，共檢測到了186條酯酶同工酶譜帶，每個菌株所具有的酶帶數(shù)為5～9條不等，多數(shù)為6～8條，27個供試菌株共有17種酶譜類型，其中部分菌株之間酶譜完全相同。聚類分析結(jié)果表明，在81％的相似水平上，供試的27個菌株可分為七個大類。第一類：Y1(寶山

2、)、云苓1號、5.78、茯苓3號、A9、A10、岳西、T1、901、Z(z)、50864、靖洲28、GD和GZ；第二類：PO、華中、鄂1號和茯苓28；第三類：SD；第四類： 50478、神苓1號(S1)、SC、50876和DB；第五類有：閩006號；第六類有：L；第七類：Z(1)。部分菌株之間相似系數(shù)為1.0，表明它們親緣關(guān)系很近，這些菌株可能存在同物異名現(xiàn)象。 采用來源不同的4個茯苓菌株對40個ISSR引物進行篩選，選擇擴增穩(wěn)

3、定、多態(tài)性較好的12個引物用于ISSR分析。在正交優(yōu)化擴增體系和篩選退火溫度的基礎(chǔ)上，用12條引物對27個茯苓菌株進行ISSR指紋圖譜分析，共擴增出85條DNA帶，其中多態(tài)性帶64條，占總帶數(shù)的75.29％，平均每個引物擴增出7.1條帶。聚類分析表明，在82％的相似水平上，27個茯苓菌株可分為六個大類。第一類：Y1(寶山)、A9、50478、Z(z)、鄂1號、Z(1)、50864、DB、901、5.78、GZ、GD、云苓1號、茯苓3號、

4、岳西、華中、茯苓28、靖洲28、A10、T1；第二類：野生菌株P(guān)0和閩006號；第三類：山東SD；第四類：安徽的野生菌株L；第五類：50876和S1；第六類：四川的SC菌株。 ISSR分析進一步驗證了酯酶同工酶分析的結(jié)果，同時也彌補了酯酶同工酶在蛋白質(zhì)水平上分析的不足。ISSR和酯酶同工酶分析的結(jié)果，同時將野生菌株L、山東菌株SD及福建菌株閩006各自劃為獨立的三個類群中，并且均將GZ和GD，云苓1號和茯苓3號，Z(z)和508

5、64，S1與50876等菌株歸為相似系數(shù)較高的同類中。但ISSR分析結(jié)果與酯酶同工酶分析結(jié)果在一定程度上也存在著差異。首次應(yīng)用ISSR標記技術(shù)對茯苓進行菌株鑒定和種質(zhì)資源多樣性分析，表明ISSR標記技術(shù)具有簡便、高效，多態(tài)性高，重復(fù)性好的特點，在茯苓菌株鑒別及親緣關(guān)系分析中具有較高的應(yīng)用價值。 茯苓代料栽培技術(shù)研究表明，以松木屑、松木碎塊作為代料栽培的主要原料，采用栽培地搭置低矮簡易棚，試驗效果較好，其茯苓引疤接種成活率達92.