呼吸道感染患者外周血中肺炎嗜衣原體的檢測與分析.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用PCR法和ELISA法分別檢測呼吸道感染患者PBMC和RBC中的Cpn DNA及血清中Cpn-IgG，以了解本地區(qū)Cpn的感染率；并結(jié)合呼吸道感染患者病史及其他臨床資料，分析在呼吸道疾病中Cpn感染的重要性，為監(jiān)測該病原體的流行及進一步研究其預(yù)防措施提供一定的參考。
　　方法：
　　收集173名呼吸道感染患者和52名健康體檢者外周血標本，分離PBMC、血清和紅細胞。用基因組DNA提取試劑盒提取純化PBM

2、C和RBC中的DNA，以該DNA為模板，用特異性引物體外PCR擴增Cpn16S rRNA和MOMP基因。擴增產(chǎn)物按照標準方法在1.5％瓊脂糖凝膠中電泳鑒定，并對產(chǎn)物 DNA進行測序，并與Genebank中登錄的Cpn AR-39序列進行BLAST比較，以進一步確認擴增產(chǎn)物為Cpn特異性基因。用ELISA診斷試劑盒（Savyon Diagnostics）檢測待測血清中的Cpn-IgG抗體。通過PCR與ELISA的檢測結(jié)果，結(jié)合臨床資料進行

3、綜合分析。
　　結(jié)果：
　　以PBMC DNA提取物為模板，呼吸道感染組中Cpn MOMP陽性率為32.40%（56/173），16S rRNA陽性率為33.52%（58/173）；在對照組52人中，5人MOMP和16S rRNA擴增陽性，陽性率為9.62%；經(jīng)測序比對：MOMP擴增產(chǎn)物與Cpn AR-39的MOMP基因99%一致；16S rRNA擴增產(chǎn)物與AR-39的16S rRNA基因97%一致。在所有的RBC DNA樣

4、本中均未檢出Cpn基因。ELISA檢測血清Cpn-IgG，感染組陽性率50.87%（88/173），對照組陽性率為30.77%（16/52）。血清Cpn-IgG抗體檢測及16S rRNA和MOMP PCR擴增結(jié)果均顯示呼吸道感染組Cpn感染陽性指標均顯著高于健康對照組。ELISA、16S rRNA PCR及MOMP PCR三種方法檢測Cpn感染指標在各年齡組的陽性率分別為：18～40歲年齡組40.00%（14/35）、22.86%（8/

5、35）和17.14%（6/35）；41～60歲年齡組27.78%（10/36）、13.89%（5/36）和13.89%（5/36）；61～79歲年齡組60.24%（50/83）、48.19%（40/83）和48.19%（40/83）；80歲以上年齡組73.68%（14/19）、26.32%（5/19）和26.32%（5/19）。根據(jù)各組的陽性率可以看出，老年人的Cpn感染率最高。3例PCR陽性的呼吸道感染患者Cpn-IgG檢測為陰性；同

6、樣35例Cpn-IgG陽性的患者，35例16S rRNA PCR陰性，33例MOMP陰性；而兩種Cpn特異性基因的PCR檢測結(jié)果高度一致。在臨床常見的呼吸道疾病中，以COPD患者的Cpn感染指標檢處率最高，提示Cpn感染可能是COPD發(fā)生發(fā)展的一個重要原因。
　　結(jié)論：
　　1）PCR法和ELISA法均在呼吸道感染患者不同年齡階段檢出較高的Cpn感染指標，說明Cpn是本地區(qū)呼吸道感染常見的病原體之一。
　　2）老年人是