沙眼衣原體質(zhì)粒在呼吸道感染中的作用及其機(jī)制初步研究.pdf

1、第一部分沙眼衣原體質(zhì)粒缺陷菌株感染人呼吸道上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)特性分析
　　目的：
　　分析沙眼衣原體質(zhì)粒缺陷菌株感染人呼吸道上皮細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)。
　　方法：
　　用流行的人生殖道沙眼衣原體血清型D野生菌株(wild type， WT)及其相應(yīng)的質(zhì)粒缺陷菌株(plasmid-free，PF)建立人肺支氣管上皮BEAS-2B細(xì)胞感染模型，分別測(cè)定各衣原體菌株具有感染性的子代原體的動(dòng)態(tài)變化、繪制生長(zhǎng)曲線，用間接免疫熒

2、光觀察不同感染時(shí)間點(diǎn)包涵體形態(tài)。
　　結(jié)果：
　　間接免疫熒光結(jié)果顯示，有質(zhì)粒株較無質(zhì)粒株的包涵體形態(tài)更大。生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示不同菌株的生長(zhǎng)趨勢(shì)一致，但有質(zhì)粒菌株產(chǎn)生和釋放衣原體子代感染性顆粒更多。
　　結(jié)論：
　　有無質(zhì)粒衣原體菌株在呼吸道上皮的生長(zhǎng)狀況不同，提示衣原體質(zhì)粒直接介導(dǎo)宿主細(xì)胞-沙眼衣原體相互作用，對(duì)衣原體子代感染性顆粒的釋放和感染傳播有作用。
　　第二部分沙眼衣原體質(zhì)粒在新生鼠肺炎中的作用

3、r>　　目的：
　　模擬垂直傳播導(dǎo)致的呼吸道感染，構(gòu)建沙眼衣原體新生鼠肺炎模型并探討衣原體質(zhì)粒對(duì)致病力的影響。
　　方法：
　　將出生24h內(nèi)的48只BALB/c新生鼠隨機(jī)分成4組，每組12只，WT組感染有質(zhì)粒的沙眼衣原體血清型D野生菌株，PF組感染同型無質(zhì)粒菌株，磷酸鹽緩沖液(PBS)組予相同劑量PBS處理，正常組無處理。于4、7、11d各處死4只取標(biāo)本，逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)肺組織內(nèi)ompA基因mRNA水平；肺組織蘇木素

4、-伊紅（H&E）染色及病理評(píng)分；髓過氧化物酶(MPO)免疫組化染色分析肺中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)TNF-α及IFN-γ。報(bào)告基因分泌型胚胎堿性磷酸酶(SEAP)實(shí)驗(yàn)體外檢測(cè)TLR2、NF-κB激活。
　　結(jié)果：
　　感染后肺組織衣原體培養(yǎng)陰性，而ompA基因mRNA檢測(cè)及MPO免疫組化染色陽性，證實(shí)WT及PF菌株皆可感染新生鼠肺，引起間質(zhì)性改變伴中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，PF組的肺組織病理評(píng)分(1.10±

5、0.19)及 PMN計(jì)數(shù)(21.06±10.92)均低于 WT組(分別為1.44±0.17和43.90±17.17)，P值分別為0.048和0.005；ELISA示W(wǎng)T組新生鼠肺內(nèi)TNF-α(623.35±37.23)和 IFN-γ(2206.83±854.22)水平較對(duì)照組(分別為470.93±20.83和737.97±79.89)升高（P值分別為0.000和0.038），而PF組(分別為531.59±34.14和1099.86±42