復(fù)方腎炎片對(duì)阿霉素腎病幼鼠模型的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　兒童原發(fā)性腎病綜合征(primary nephrotic syndrome,PNS)是小兒最常見的腎小球疾病之一，長(zhǎng)期采用糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)治療可出現(xiàn)代謝紊亂、庫(kù)欣貌等并發(fā)癥，而且約有23％PNS患兒對(duì)激素治療不敏感，為激素耐藥型腎病綜合征（steroid-resistant nephrotic syndrome,SRNS)且呈逐年上升。復(fù)方腎炎片含有丹參、黃芪等中藥成分，臨床用于PNS患

2、兒有較好的輔助治療效果。本研究通過對(duì)阿霉素腎病幼鼠動(dòng)物模型進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，旨在觀察復(fù)方腎炎片聯(lián)合強(qiáng)的松對(duì)阿霉素腎病幼鼠的治療作用及對(duì)ET-1、TGF-β1表達(dá)的影響。
　　方法：
　　40只4周齡SD大鼠簡(jiǎn)單隨機(jī)化法選出8只為正常對(duì)照組（A組），剩余32只一次性尾靜脈注射阿霉素6.5mg/kg后隨機(jī)分為4組，即模型對(duì)照組（B組）、復(fù)方腎炎片組（C組）、強(qiáng)的松組（D組）、聯(lián)合用藥組（E組），每組各8只。對(duì)照組給予等量生理鹽水尾

3、靜脈注射。實(shí)驗(yàn)時(shí)間12周。造模后第1周～第12周每日晨灌胃，A組、B組給予蒸餾水灌胃，C組予以復(fù)方腎炎片水提取液6.75g/kg灌胃，D組給以強(qiáng)的松混懸液6mg/kg灌胃，E組給予強(qiáng)的松6mg/kg+復(fù)方腎炎片6.75g/kg灌胃，灌胃容積為1ml/kg。
　　造模前1天、造模后2周末、4周末、8周末、12周末檢測(cè)大鼠24小時(shí)尿蛋白，12周末檢測(cè)各組大鼠血白蛋白、血脂及腎功并行腎臟病理檢查，并于12周末采用ELISA法及q-PCR

4、法檢測(cè)各組大鼠血清TNF-α、IL-18、ET-1、TGF-β1水平及腎組織ET-1、TGF-β1mRNA表達(dá)并行腎臟透射電鏡檢查。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1．A組大鼠5個(gè)時(shí)間點(diǎn)尿蛋白水平無顯著變化(F=5.03；P>0.05)，B組大鼠各時(shí)間點(diǎn)尿蛋白顯著高于A組(F=23.59；P<0.05)。C、D、E組8周末及12周末尿蛋白水平較 B組有顯著下降(F=15

5、.66；P<0.05)，E組12周末較A組無顯著性差異(F=7.04；P>0.05)且較C、D組有顯著性下降(F=19.61；P<0.05)。
　　2．各組大鼠12周末血清白蛋白、腎功、血脂比較：12周末B組、C組和D組白蛋白及總膽固醇、甘油三酯較A組白蛋白下降，血脂升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F白蛋白=27.13；F總膽固醇=19.80；F甘油三酯=19.05；P<0.05)。E組白蛋白及總膽固醇、甘油三酯較A組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F白蛋

6、白=8.41；F總膽固醇=6.69；F甘油三酯=7.25；P>0.05)，B、C、D、E組尿素氮及肌酐較A組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F尿素氮=10.75；F肌酐=9.43；P>0.05)。
　　3．12周末E組相較B、C、D組有較輕病理損害，腎間質(zhì)無增生，腎小管未見蛋白管型。
　　4．B組、C組、D組TNF-α、IL-18、ET-1、TGF-β1水平12周末時(shí)較A組12周末時(shí)均有顯著增高(FTNF-α=14.93；FIL-18=19.

7、43；FET-1=16.23；FTGF-β1=17.97；P<0.05)，12周末時(shí)C組、D組、E組較B組均有顯著性改善(FTNF-α=18.32；FIL-18=17.68；FET-1=17.29；FTGF-β1=20.14；P<0.05)。C、D組較E組TNF-α、IL-18、ET-1、TGF-β1水平升高，（FTNF-α=20.75；FIL-18=15.34；FET-1=22.57；FTGF-β1=20.54；P<0.05）。

8、>　　5．q-PCR示B組、C組、D組ET-1 mRNA表達(dá)量較A組均有顯著增高(F=14.96；P<0.05)，C組、D組、E組較B組均有顯著性改善(F=19.41；P<0.05)，但E組與A組未見顯著性差異(F=7.23；P>0.05)。分析各組TGF-β1mRNA表達(dá)量，B組較A組有顯著增高(F=24.61；P<0.05)，但C、D、E組與A組未見顯著性差異(F=9.07；P>0.05)。C、D、E組較B組均有顯著性改善(F=23

9、.59；P<0.05)。
　　6．透射電鏡示B組系膜區(qū)細(xì)胞增生，上皮細(xì)胞有空泡形成，C組及D組系膜細(xì)胞損傷及腎小管蛋白顆粒均有減輕。E組上皮細(xì)胞、系膜區(qū)細(xì)胞等均未見明顯異常，腎小管可見少量蛋白顆粒。
　　結(jié)論：
　　1．復(fù)方腎炎片聯(lián)合強(qiáng)的松能夠明顯降低蛋白尿，改善阿霉素腎病大鼠腎功能并降低血脂水平，延緩腎臟病理損害的進(jìn)展，其作用機(jī)制是通過下調(diào) ET-1、TGF-β1 mRNA的表達(dá)，減輕腎臟纖維化的過程來實(shí)現(xiàn)。