兒童流感的臨床特征分析及Toll樣受體3基因多態(tài)性與兒童流感遺傳易感性、病情嚴(yán)重性的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：
　　流行性感冒(簡(jiǎn)稱流感)是由流感病毒引起的一種急性上呼吸道傳染病，從1918年西班牙流感直至2009年甲型H1N1流感，引起了全世界的廣泛關(guān)注，據(jù)WHO報(bào)道，全世界每年的重癥流感病例有3~5百萬(wàn)，其中死亡人數(shù)為25~50萬(wàn)，而其中，5歲及以下的兒童對(duì)疾病的耐受力低下，是重癥流感的高風(fēng)險(xiǎn)人群之一。世界銀行估計(jì)，2009年H1N1流感大流行造成了3萬(wàn)億美元的經(jīng)濟(jì)損失?；诹鞲袑?duì)廣大兒童的健康和生命安全造成的威脅，以及對(duì)社

2、會(huì)造成的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和損失，因此，積極探討兒童流感的遺傳易感因素，對(duì)流感的易感人群進(jìn)行早期預(yù)防、防止流感的發(fā)生和進(jìn)一步發(fā)展為重癥流感、個(gè)體化治療以及預(yù)后評(píng)估，對(duì)于降低流感的發(fā)病率和死亡率以及減輕社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)具有重要意義。Toll樣受體3(Toll-like receptor3,TLR3)是先天性免疫和固有免疫中重要的識(shí)別受體，廣泛分布于樹突狀細(xì)胞(DC)，表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)膜的表面和胞內(nèi)溶酶體中，可識(shí)別病毒核酸及內(nèi)吞體內(nèi)的核酸，研究認(rèn)為，TLR3

3、信號(hào)通路的過度活化和調(diào)節(jié)失常與流感的發(fā)病有關(guān)，通過影響 TLR3信號(hào)通路而調(diào)控炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)以及抗病毒免疫反應(yīng)，TLR3的表達(dá)異?；蚪Y(jié)構(gòu)功能異?？赡苡绊懥鞲胁《镜淖R(shí)別和信號(hào)的進(jìn)一步傳遞，從而引起異常的免疫應(yīng)答。目前已有研究表明TLR3 rs5743313 C/T和TLR3 rs5743315 A/C多態(tài)性引起的氨基酸改變可導(dǎo)致TLR3受體胞外域發(fā)生改變，影響 Toll樣受體信號(hào)傳導(dǎo)和炎癥介質(zhì)的生成，可能使機(jī)體更易感染流感病毒。Esposi

4、to等研究發(fā)現(xiàn)TLR3 rs5743313C/T多態(tài)性與流感肺炎相關(guān)， TLR3 rs5743315A/C多態(tài)性可能在流感導(dǎo)致的肺炎中起到重要作用。Hidaka等在1例流感相關(guān)性腦病的患者中發(fā)現(xiàn)TLR3（F303S）的錯(cuò)義突變，表明TLR3基因（F303S）的突變可能與重癥流感并發(fā)癥相關(guān)。雖然上述研究表明，TLR3基因多態(tài)性與流感易感性和病情嚴(yán)重性存在關(guān)聯(lián)，但目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)的研究。本課題即從單核苷酸多態(tài)性的角度，通過檢測(cè)和分析流感患兒

5、TLR3基因多態(tài)性，探討TLR3基因多態(tài)性與兒童流感的遺傳易感性、病情嚴(yán)重性的關(guān)系。
　　研究目的：
　　1．分析2013年3月至2013年5月期間在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心住院治療的86例流感患兒的臨床特征；
　　2．檢測(cè)以上流感患兒的TLR3基因多態(tài)性，初步探討TLR3基因多態(tài)性與兒童流感遺傳易感性、病情嚴(yán)重性的關(guān)系。
　　方法：
　　收集2013年3月至2013年5月收治于廣州市婦女兒童醫(yī)療中心確診的8

6、6例甲型或乙型流感患兒的病歷資料，總結(jié)分析其臨床特點(diǎn)。用基因測(cè)序的方法對(duì)上述86例流感患兒的TLR3基因進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)和分析，并將檢測(cè)到的多態(tài)性位點(diǎn)與千人基因組項(xiàng)目數(shù)據(jù)庫(kù)中的197名中國(guó)漢族人群進(jìn)行對(duì)照，采用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算各組等位基因頻率和基因型頻率，χ2檢驗(yàn)分析中國(guó)漢族人群、輕癥組、重癥組間等位基因頻率和基因型頻率的分布差異；計(jì)算OR值及其95％CI以評(píng)估等位基因及各基因型的風(fēng)險(xiǎn)。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行各組間的數(shù)據(jù)比較，P<0.05為差異有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1．86例流感患兒中，輕癥組43例，重癥組43例，輕癥組平均年齡4.58±2.69歲，重癥組平均年齡2.43±1.83歲(P<0.05)，住院時(shí)間輕癥組為5.05±2.50天，顯著短于重癥組的13.86±11.25天(P<0.05)，重癥組有16例患兒住院期間入住PICU的時(shí)間為9.67±7.89天。對(duì)重癥組在入院24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行PRISMⅢ評(píng)分為5.21±3.95,16例危重流感患兒入PICU24

8、小時(shí)內(nèi)進(jìn)行PRISMⅢ評(píng)分為9.44±3.29；重癥組入院24小時(shí)內(nèi)PaO2/FiO2分別為261.16±76.95，16例危重流感患兒入PICU24小時(shí)內(nèi)的PaO2/FiO2結(jié)果為191.69±66.9；胸部影像學(xué)表現(xiàn)為雙肺滲出或浸潤(rùn)影在重癥組占58.1%；在43例重癥組患兒中，15例發(fā)生呼吸衰竭(34.9%)，進(jìn)行機(jī)械通氣的時(shí)間為6.15±4.81天；在43例重癥組患兒中肝功能障礙的發(fā)生率為16.3%；神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的發(fā)生率為16

9、.3%；2例患兒發(fā)生凝血系統(tǒng)功能障礙，2例發(fā)生循環(huán)系統(tǒng)功能障礙，2例死亡。
　　2．TLR3基因SNPs在中國(guó)漢族人群與歐洲人群、中國(guó)漢族人群與非洲人群間比較，各組間、各SNPs的等位基因頻率及基因型頻率均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3．TLR3基因rs1879026的等位基因G和T的頻率在中國(guó)漢族人群中分別為79.4%和20.6%,病例組分別為75.0%和25.0%，病例組等位基因T的頻率明顯高于中國(guó)漢族人群，兩

10、組相比具有顯著性差異(P=0.039<0.05)，OR值為1.539，95%CI=[1.020-2.323]。rs1879026無(wú)論等位基因頻率和基因型頻率在輕癥組與重癥組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　4．TLR3基因rs5743312、rs5743313、rs5743314的SNPs無(wú)論等位基因頻率和基因型頻率在病例組與中國(guó)漢族人群、輕癥組與重癥組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　5．研究發(fā)現(xiàn)TLR

11、3基因存在1個(gè)由3個(gè)SNPs(rs1879026 rs5743313、rs5743314)組成的單倍域，共存在4個(gè)單倍型即GCG、TCG、GTC、GTG，以上4個(gè)單倍型在病例組和中國(guó)漢族人群、輕癥組和重癥組之間比較，均無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　6．對(duì)病例組、中國(guó)漢族人群分別進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)，結(jié)果顯示兩組的SNPs基因型期望值和觀察值吻合較好，具有很好的群體代表性。
　　結(jié)論：

12、r>　　1．相對(duì)于輕癥流感患兒，重癥流感患兒以3歲以下嬰幼兒為主；早期的PaO2／FiO2、影像學(xué)檢查、PRISMⅢ評(píng)分及臟器功能障礙評(píng)估有助于對(duì)流感患兒病情危重程度盡早作出正確判斷。
　　2．TLR3基因rs1879026T等位基因與兒童流感的易感性相關(guān)，但與兒童流感的病情嚴(yán)重性無(wú)明顯的相關(guān)性。
　　3．TLR3基因rs5743312、rs5743313、rs5743314的多態(tài)性與兒童流感的易感性和病情嚴(yán)重性均無(wú)明顯的相