LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體治療裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的實驗研究.pdf

1、第一部分、LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量評價
　　目的:制備LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體，并觀察其物理學(xué)特性及穩(wěn)定性。
　　方法:采用薄膜分散法結(jié)合生物素-鏈霉親和素橋接法制備LHRH靶向鴉膽子油脂質(zhì)體，測定其粒徑、電位、包封率。以滲漏率為指標(biāo)考察其穩(wěn)定性，并觀察其適宜的貯存溫度。
　　結(jié)果:通過正交設(shè)計篩選出制備LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體的最佳處方為:磷脂與膽固醇比例4∶1，藥脂比3∶10，DSPE-PE

2、G2000-Biotin與磷脂質(zhì)量比為3％，超聲時間8min。LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體平均粒徑為(155.1±14.5) nm，Zeta電位為-（24.1±0.54）Mv，平均包封率達（92.2±1.59）％。離心加速實驗證實該脂質(zhì)體穩(wěn)定性參數(shù)KE值變化較小。在4℃條件下放置15天為淺白色，脂質(zhì)體無分層、沉淀現(xiàn)象;25℃室溫放置一周即出現(xiàn)大量絮狀沉淀，外觀渾濁。
　　結(jié)論:采用薄膜-超聲分散法結(jié)合生物素-鏈霉親和素橋接法成功制

3、備了LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體，粒徑均勻，包封率較高，在4℃條件下保存可提高其穩(wěn)定性。
　　第二部分、LHRHa靶向脂質(zhì)體體內(nèi)尋靶能力的初步研究
　　目的:觀察LHRHa靶向脂質(zhì)體對裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的體內(nèi)尋靶能力。
　　方法:采用細(xì)胞懸液注射法建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型，同時采用薄膜分散法制備空白脂質(zhì)體、含香豆素-6（一種綠色熒光物質(zhì)）的LHRHa靶向脂質(zhì)體和普通香豆素-6脂質(zhì)體。將建模后四周的裸鼠6只隨機分為

4、三組:空白脂質(zhì)體組、香豆素-6脂質(zhì)體組和LHRHa靶向香豆素-6脂質(zhì)體組，每組2只。分別從尾靜脈注射入相應(yīng)藥物，給藥4小時后在動物活體成像儀下觀察LHRHa靶向脂質(zhì)體的體內(nèi)尋靶能力。
　　結(jié)果:裸鼠卵巢癌皮下移植瘤動物模型易于建立。動物活體成像實驗中可以看到，LHRHa靶向香豆素-6脂質(zhì)體組腫瘤部位熒光強度比香豆素-6熒光脂質(zhì)體組更明顯，而空白脂質(zhì)體組腫瘤部位未觀察到熒光。
　　結(jié)論:建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型方法簡單，是

5、研究卵巢癌靶向治療較為理想的動物模型。LHRHa靶向脂質(zhì)體對卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有良好的體內(nèi)尋靶能力。
　　第三部分、LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體對裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的治療作用及機制研究
　　目的:探討LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體對裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的抑制作用及其機制。
　　方法:采用細(xì)胞懸液注射法建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型，將28只裸鼠隨機分為四組（Ⅰ組PBS組，Ⅱ組鴉膽子油乳注射液組，Ⅲ組鴉膽子油脂質(zhì)體組，

6、Ⅳ組為LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體組），每組7只。經(jīng)過不同處理后，每組隨機抽2只裸鼠處死，剝?nèi)∧[瘤組織做HE染色觀察腫瘤組織形態(tài)，同時用免疫組化法檢測Caspase3、Caspase8表達，用Western-blot法檢測各組腫瘤組織Caspase3、Caspase8、bax、bcl-2表達。余下的裸鼠觀察腫瘤生長情況及生存時間。
　　結(jié)果:Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組中位生存時間分別為(42.4±1.47)天，(46.0±1.18)天

7、，(52.0±1.40)天，(58.6±1.03)天。與Ⅰ組比較，Ⅲ組、Ⅳ組中位生存時間明顯延長(P＜0.05)。其中以Ⅳ組（LHRHa靶向脂質(zhì)體組）最長，其中位生存時間明顯高于其他組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Ⅳ組腫瘤體積增長速度較Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組明顯減緩。Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組凋亡相關(guān)因子Caspase3和Caspase8、bax蛋白表達均高于Ⅰ組，以LHRHa靶向脂質(zhì)體組最高(P＜0.05)。而Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組凋亡抑制因子bcl-2