胃炎飲對膽汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜-黏液屏障保護作用機制研究.pdf

1、目的：本研究旨在通過觀察膽汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理形態(tài)以及胃黏膜氨基己糖、磷脂、前列腺素E2(PGE2)、6-酮-前列腺素Flα(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)等指標的變化，驗證胃炎飲的藥效，并探討該藥對膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜-黏液屏障的保護作用機制。 方法: 第一部分：胃炎飲對膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜病理形態(tài)學(xué)的影響1 HE染色健康wistar大鼠40只，雌雄各半，隨機分為5組，每組8只，即

2、正常組、模型組、胃炎飲高劑量組、胃炎飲低劑量組、嗎叮啉對照組。胃炎飲高、低劑量組和嗎叮啉對照組從造模開始后第二周至第五周造模結(jié)束每天給藥，正常組同時灌服生理鹽水，每日1次，連續(xù)28天。除正常組外，其余各組以15ml/kg體重反流液空腹灌胃，每日1次，連續(xù)35天。最后一次灌胃后禁食24h，無菌操作剖腹取胃，沿胃大彎剪開，用冰生理鹽水漂洗胃內(nèi)容物，先肉眼觀察胃黏膜的大體情況，然后從靠近幽門部剪取一塊約1mm3，4％多聚甲醛固定，HE巳染色，

3、光鏡下觀察胃黏膜的病理組織學(xué)的變化。并且做各組炎癥細胞半定量分析。 2.AB/PAS染色動物分組、用藥同前，每組八只，最后一次灌胃后禁食24h，斷頭處死。無菌操作剖腹取胃，用冰冷的生理鹽水漂洗胃內(nèi)容物，濾紙吸干。從靠近幽門部剪取一塊約1mm3左右的胃黏膜，4％多聚甲醛固定，AB/PAS染色，在光鏡下觀察胃黏膜病理形態(tài)學(xué)變化，并用測微尺在光鏡100倍下測量胃黏膜AB/PAS陽性層厚度，自竇、體交界500 um處開始，每張切片取平均

4、間隔測量10個部位后取平均值。 第二部分：胃炎飲對膽汁反流性胃炎大鼠胃黏液層磷脂及氨基己糖含量的影響動物分組、用藥情況同前，每組8只。最后一次灌胃后禁食24h，斷頭處死；無菌操作剖腹取胃，用冰冷的生理鹽水漂洗胃內(nèi)容物，濾紙吸干，取1/4胃，用載玻片刮取胃黏膜，稱重，取其中1/2供測磷脂，將胃黏膜刮取物加甲醇/氯仿(1:1)2ml抽提，加塞，振混5min，吸底層液體1ml置消化管內(nèi)待測；另1/2供測氨基己糖，將胃黏膜刮取物加6mo

5、l/L鹽酸沸水浴1h，冷卻后加4mol/L氫氧化鈉中和至pH7.0，3000r/min離心10min，取上清液1ml待測。 第三部分：胃炎飲對膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜前列腺素E2及血漿6-酮-前列腺素Fla、血栓素B2的影響動物分組、用藥情況同前，每組8只。最后一次灌胃后禁食24h，斷頭處死；無菌操作剖腹取胃，沿胃大彎剪開，用冰冷的生理鹽水漂洗胃內(nèi)容物，濾紙吸干，載玻片刮取胃黏膜組織并稱重，冰浴下制備10％組織勻漿，3000r/

6、min離心15min，取上清，-20℃以下保存，留作PGE2檢測。 大鼠禁食24小時后，斷頭取血5ml，混勻后注入含有0.2ml的EDTA-2Na(100g/L)的塑料試管內(nèi)，40C、3500r/min離心15分鐘，分離血漿和紅細胞，吸取血漿裝入普通試管，-20℃保存，供血漿6-Keto-PGF1α, TXB2檢測。 結(jié)果:第一部分：胃炎飲對膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜病理形態(tài)學(xué)的影響1 艇染色正常組大鼠胃黏膜光滑，未見破損

7、，脫落，極少見炎細胞；模型組大鼠胃黏膜出現(xiàn)明顯破損，脫落，黏膜下可見大量炎細胞浸潤；與模型組比較，胃炎飲高、低劑量組和嗎叮啉組胃黏膜破損，脫落較輕，炎細胞浸潤較少，胃炎飲高劑量組效果最佳(Fig.1-5)。其半定量指標結(jié)果顯示炎細胞浸潤：與模型組比較，胃炎飲高、低劑量組炎細胞浸潤明顯減輕(P<0.01)；嗎叮啉組亦明顯減輕(P<0.05)。(Tablel)2 AB/PAS染色模型組大鼠胃黏膜AB/PAS陽性層厚度出現(xiàn)明顯變薄、甚至缺失。

8、與模型組比較，胃炎飲高、低劑量組和嗎叮啉組胃黏膜AB/PAS陽性層厚度變薄、缺失較輕，其中以高劑量組最佳(Fig.6-10)。與模型組比較，胃炎飲高、低劑量組AB/PAS陽性層厚度明顯增加(P<0.01)；嗎叮啉組與模型組比較也有明顯改善(P<0.01)；與對照組比較，胃炎飲高劑量組AB/PAS陽性層較厚(P<0.01)。(Table2)第二部分：胃炎飲對膽汁反流性胃炎大鼠胃黏液層磷脂及氨基己糖含量的影響1 各組大鼠胃黏液層磷脂含量的比

9、較與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜磷脂含量明顯下降，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組比較，胃炎飲高、低劑量組和嗎叮啉組均可明顯升高胃黏膜磷脂含量，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，胃炎飲高劑量組與嗎叮啉組比較，胃炎飲高劑量組可明顯升高胃黏膜磷脂含量，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)； 2 各組大鼠胃黏液層氨基己糖含量的比較與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜膜氨基己糖含量明顯下降，具有非常顯著性差異(P<0.01)；與模型組比較，胃炎飲高、

10、低劑量組可明顯升高胃黏膜氨基己糖含量，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，嗎叮啉組亦可明顯升高胃黏膜氨基己糖含量，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；胃炎飲高、低劑量組與嗎叮啉組比較可明顯升高胃黏膜氨基己糖含量，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.Ol或P<0.05)。 第三部分：胃炎飲對膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜PGE2及血漿6-Keto-PGF1α、TXB2的影響1 各組大鼠胃黏膜PGE2含量的比較與模型組比較，胃炎飲高、低劑量組和嗎叮啉組均可明

11、顯升高PGE2含量，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，與對照組比較，胃炎飲高、低劑量組PGE2含量明顯增高，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 2.各組大鼠血漿血栓素B2、6-Keto-PGF1α含量的比較與模型組比較，胃炎飲高、低劑量組、嗎叮啉組均可提高6-Keto-PGF1α水平，降低TXB2水平(P<0.01或P<0.05)，與對照組比較，胃炎飲高劑量組6-Keto-PGF1α水平明顯高于嗎叮啉組，TXB2水平明顯低于嗎叮啉組

12、，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論: 1.胃炎飲治療膽汁反流性胃炎的療效確切，可顯著改善胃黏膜AB/PAS陽性層厚度，減輕炎細胞浸潤程度從而改善膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜的病理形態(tài)學(xué)，具有保護胃黏膜-黏液屏障的作用。 2.胃炎飲能顯著升高膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜磷脂及氨基己糖含量增強胃黏液的粘滯性、疏水性，減緩了H+通過黏液層的速度，從而增強胃黏膜抵抗外來因子的侵襲作用，減輕胃黏膜損傷。 3.胃炎飲能