Apoptin相互作用蛋白FAM96B在腫瘤中的表達及功能的研究.pdf

1、Apoptin/VP3（凋亡素）是來源于雞貧血病毒的一種小分子蛋白，通過線粒體途徑特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，而對正常細(xì)胞無毒副作用，但其作用機制尚未完全闡明。
　　 目前，相繼發(fā)現(xiàn)了多種與Apoptin 相互作用的蛋白質(zhì)，如：death effector domainassociated factor (DEDAF)，anaphase promoting complex/cyclosome subunit 1(APC/C)，N-m

2、yc interacting protein (NMI)，Acid ceramidase，SUMO，promyelocytic leukemia protein (PML)，Ppil3，CRM1，imprtin-β1等，據(jù)文獻報道，這些蛋白質(zhì)均與Apoptin 特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。2009年，Maddika等報道，CDK2是磷酸化修飾Apoptin 108T的激活酶，Apoptin與PI3K的p85亞基相互作用別構(gòu)激活PI3

3、K，PI3K 活化后使Akt 激活，Akt與Apoptin 共定位于核內(nèi)，進一步激活CDK2，CDK2 活化后磷酸化修飾Apoptin。因此，分析研究這些與Apoptin 相互作用的蛋白質(zhì)，對闡明Apoptin的誘導(dǎo)腫瘤特異性凋亡機制具有重要意義。
　　 酵母雙雜交系統(tǒng)是目前研究蛋白之間相互作用的主流方式之一。前期荷蘭萊頓大學(xué)某課題組以Apoptin 為誘餌蛋白，通過酵母雙雜交系統(tǒng)釣取到Apoptin 相互作用蛋白十種，AIP1

4、、AIP2、AIP3、AIP4、AIP5、AIP6、AIP7、AIP8、AIP9與AIP10，其中AIP3 即為FAM96B。
　　 FAM96B，96 序列相似的家庭成員B，亦稱為CGI-128[17-20]，位于染色質(zhì)16q22.1-q22.3，據(jù)推測分子量大概在20kD，其功能尚未闡明。2010年 Shinsuke Ito.等報道FAM96B與有絲分裂染色體分離和不規(guī)則形狀細(xì)胞核的堆積密切相關(guān)，可能導(dǎo)致XP-D（著色性干皮

5、?。┖?XP-D/CS等家族遺傳疾病較高的發(fā)病率。另外，荷蘭萊頓大學(xué)這個課題組已經(jīng)通過免疫共沉淀方法從胞內(nèi)證實了FAM96B與Apoptin 相互作用。他們進一步研究發(fā)現(xiàn)：在腫瘤細(xì)胞中 FAM96B分布于細(xì)胞質(zhì)，過表達FAM96B 通過與Apoptin的相互作用可致部分Apoptin 滯留于細(xì)胞質(zhì)中；過表達FAM96B的顯著降低Apoptin 誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡率，從而抑制Apoptin誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的效應(yīng)；FAM96B在乳腺癌組

6、織中mRNA的表達水平顯著低于正常組織。FAM96B 有可能是一種新的抑癌基因。
　　 本研究通過熒光實時定量RT-PCR方法檢測FAM96B在腫瘤細(xì)胞以及腫瘤組織中mRNA的表達水平，發(fā)現(xiàn)FAM96B在HepG2細(xì)胞中mRNA的表達水平顯著低于L02細(xì)胞；FAM96B在肺癌組織中mRNA的表達水平顯著低于正常組織；FAM96B在肝癌組織中mRNA的表達水平顯著低于正常組織。進一步研究，HepG2細(xì)胞內(nèi)過表達FAM96B，分別用

7、AnnexinV-FITC/PI 雙染法檢測HepG2細(xì)胞凋亡率及MTT 法檢測HepG2細(xì)胞存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：過表達FAM96B 促進HepG2細(xì)胞凋亡；過表達FAM96B 抑制HepG2細(xì)胞增殖。以上結(jié)果均顯示FAM96B有可能是一種新的抑癌基因。
　　 到目前為止，關(guān)于Apoptin 特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機制尚不十分清楚。對FAM96B的深入研究不僅能夠進一步了解Apoptin的作用機制，也可能為腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機