利用重組人源膠原蛋白制備生物醫(yī)學(xué)組織工程材料.pdf

1、本論文以基因工程菌Pichia pastoris高密度發(fā)酵獲得的重組人源膠原蛋白(Recombinant Human-source Collagen，RHSC)為主要研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行分離純化和結(jié)構(gòu)表征，并與殼聚糖復(fù)合，通過冷凍干燥技術(shù)制備三維多孔狀海綿支架。選擇具有強(qiáng)抗氧化活性的原花青素(Proanthocyanidins，PA)作為交聯(lián)劑，以期提高支架的各方面特性。
　　1.通過分離純化獲得的RHSC達(dá)到電泳純，測(cè)試顯示:純度

2、＞99％，回收率＞93％。采用DSC，紫外光譜，紅外光譜和NMR對(duì)RHSC進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，并與標(biāo)準(zhǔn)Ⅲ型膠原蛋白比對(duì)，確定RHSC具有Ⅲ型膠原蛋白的特征結(jié)構(gòu)。
　　2.通過改變殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿基質(zhì)制備過程中的因素發(fā)現(xiàn)，醋酸的濃度和殼聚糖與RHSC的質(zhì)量比是影響微觀結(jié)構(gòu)形成的關(guān)鍵因素。通過PA交聯(lián)作用制備的海綿成品具有良好的理化性質(zhì)，其內(nèi)部孔徑約為110-160μm，孔隙率＞92％，吸水率約為3900％;紅外光譜測(cè)試發(fā)現(xiàn)，P

3、A與海綿基質(zhì)可以形成穩(wěn)定的氫鍵;DSC和TG分析顯示:通過交聯(lián)作用，海綿的熱穩(wěn)定性提高;體外酶解實(shí)驗(yàn)表明，交聯(lián)后海綿的抗酶解能力增強(qiáng)。對(duì)海綿進(jìn)行生物相容性研究，內(nèi)容包括細(xì)胞的黏附、遷移、增殖和細(xì)胞形態(tài)等方面，結(jié)果顯示:海綿支架具有較好的細(xì)胞相容性。
　　PA交聯(lián)的殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿是一種理化性質(zhì)良好的生物材料，對(duì)細(xì)胞的黏附、生長和增殖都有一定的促進(jìn)作用，盡管目前還處于實(shí)驗(yàn)研究階段，但有望進(jìn)一步應(yīng)用于組織工程化器官的研究以