VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在多囊卵巢中的表達(dá)及意義.pdf

1、 目的：多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)是常見于育齡婦女的生殖內(nèi)分泌疾病,以稀發(fā)排卵或無排卵、高雄激素血癥和多囊卵巢為主要特征,臨床表現(xiàn)多樣。PCOS 與胰島素抵抗、糖尿病以及肥胖關(guān)系密切,其發(fā)病機(jī)制仍未完全明確。大量未成熟卵泡形成排卵障礙性不孕是本病的重要原因,已有研究發(fā)現(xiàn)此與顆粒細(xì)胞的功能障礙有關(guān)。前期我們檢測Survivin、XIAP及Caspase-3在多囊卵巢顆粒細(xì)胞的表達(dá)情

2、況及其相關(guān)性,探討凋亡抑制蛋白基因及Caspase-3在多囊卵巢發(fā)生、發(fā)展中的作用,為多囊卵巢的治療提供了一定實驗依據(jù)。由于PCOS病因的復(fù)雜性,可能存在的病因較多,故本次希望從血管生長因子角度來研究探討該疾病的發(fā)病機(jī)制。PCOS的突出病理學(xué)特點之—,是卵巢間質(zhì)及卵泡囊的血管高度增生,導(dǎo)致排卵異常。血管生成因子的調(diào)節(jié)紊亂可引起血管增生異常,同時位于卵巢內(nèi)的血管生成因子,在卵巢局部通過自分泌與旁分泌,以及細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)途徑對卵巢顆粒細(xì)胞和卵泡

3、膜細(xì)胞等調(diào)控,對卵泡的正常發(fā)育具有重要作用。卵巢內(nèi)調(diào)節(jié)因子的異?？赡苁菍?dǎo)致多囊卵巢的不排卵原因。VEGF、EG-VEGF、TGF-β1 作為血管生成因子,同時也作為卵巢內(nèi)局部調(diào)節(jié)因子與 PCOS 的發(fā)病有關(guān),本研究通過檢測 VEGF、EG-VEGF、TGF-β1 在多囊卵巢中的表達(dá),進(jìn)一步探討 PCOS 的發(fā)生機(jī)制。方法：1.選擇符合實驗組和對照組納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)的卵巢石蠟包埋組織。實驗組26例,年齡在14-39歲之間,平均28.8±

4、6.65歲；對照組12例,年齡17-39歲之間,平均29.5±5.72歲。上述患者術(shù)前均無激素服用史、陰道流血史。2.卵巢石蠟包埋組織用常溫切片機(jī)連續(xù)切片,經(jīng)攤片后貼附于載玻片上,60℃恒溫持續(xù)烘烤24小時,采用免疫組化Envision法檢測VEGF、EG-VEGF、TGF-β1在各組卵巢卵泡顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和卵巢間質(zhì)中的表達(dá)水平。3. 鏡下觀察： 采用日本OLYMPUS公司的Ax-70顯微成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察分析,每張切片隨機(jī)取8個(

5、×200)高倍視野。陽性細(xì)胞的條件：①細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰,有完整的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核結(jié)構(gòu)組成；②陽性顆粒定位、定性好；③細(xì)胞著色較背景染色顏色明顯。VEGF 陽性表達(dá)判斷以血管內(nèi)皮細(xì)胞中胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒,無棕黃色或黃色則為陰性。EG-VEGF陽性表達(dá)判斷以血管內(nèi)皮細(xì)胞中胞漿出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒,無棕黃色或黃色則為陰性。TGF-β1陽性表達(dá)判斷以細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)黃棕、黃色或黃色顆粒,無棕黃色或黃色則為陰性。4.圖像采集：由電腦進(jìn)行采集

6、圖像,采用10×10倍鏡下觀察陽性表達(dá)的各級卵泡及間質(zhì),并查找囊狀卵泡；采用 10×10 倍以及×200 倍鏡下定位觀察囊狀卵泡細(xì)胞各層,沿細(xì)胞層取連續(xù)8個視野進(jìn)行拍照。5.圖像分析：采用IPP(Image Pro plus)6.0圖像分析軟件,對囊狀卵泡顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和卵巢間質(zhì)進(jìn)行免疫組化著色后的定量分析及計算光密度(OD)值,其免疫組化著色的平均光密度(Average Optical Density；AOD)是該切片的分光密度

7、值。并比較各組間的差異以及兩組之間的差異所得數(shù)據(jù)均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x ±s)表示,采用spss 13.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,各組間比較采用t檢驗,P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果：實驗組與對照組年齡比較,P﹥0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。PCO組VEGF在卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)高表達(dá),EG-VEGF在卵巢內(nèi)膜層及基質(zhì)中高表達(dá),TGF-β1在竇狀卵泡細(xì)胞膜細(xì)胞和卵巢間質(zhì)的表達(dá)呈高表達(dá)。PCO組VEGF表達(dá)顯著高于正常組,P﹤0.05,有統(tǒng)計學(xué)意

8、義。PCO 組 EG-VEGF 表達(dá)高于正常組,P﹤0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義。TGF-β1 在 PCO 組與正常卵巢組表達(dá),P﹥0.05,無統(tǒng)計學(xué)意義。VEGF與EG-VEGF在PCO組中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。TGF-β1在PCO組與正常組差別無統(tǒng)計學(xué)意義。TGF-β1分別與VEGF、EG-VEGF在PCO組無相關(guān)性。結(jié)論：VEGF、EG-VEGF與PCO的發(fā)生、發(fā)展具有一定關(guān)系,TGF-β1 與 PCO 的發(fā)病可能關(guān)系不明顯,其中 VEGF 與