芪丹通脈片對(duì)大鼠缺血-再灌注損傷心肌保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：
　　隨著冠狀動(dòng)脈介入術(shù)及冠脈搭橋術(shù)等治療手段的廣泛應(yīng)用，伴隨發(fā)生的心肌再灌注損傷日益受到心臟病學(xué)家的高度關(guān)注。近年來(lái)，在應(yīng)用各種西藥和基因治療等手段預(yù)防再灌注損傷的同時(shí)，應(yīng)用益氣、活血、化瘀的中藥防治再灌注損傷逐漸受到重視。探討其在心肌缺血/再灌注損傷中可能的機(jī)制成為研究熱點(diǎn)。
　　目前認(rèn)為，能量代謝障礙是心肌缺血/再灌注損傷的發(fā)生基礎(chǔ)，再灌注后由于恢復(fù)供氧產(chǎn)生自由基增多，且鈣超載及炎癥反應(yīng)等因素都是引發(fā)的原因。

2、近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)在心肌缺血/再灌注損傷中至關(guān)重要。中醫(yī)藥可通過(guò)抑制炎癥細(xì)胞的趨化及浸潤(rùn)、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的合成及分泌、恢復(fù)炎癥抑制因子和促炎因子的平衡等多種途徑干預(yù)心肌缺血/再灌注損傷后炎癥反應(yīng)，發(fā)揮心肌保護(hù)作用。
　　芪丹通脈片是益氣活血的中藥復(fù)方，以往我們的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，其作用機(jī)制可能是：通過(guò)增加缺血心肌對(duì)葡萄糖的攝取及利用，以改善能量代謝障礙；有效地消除或抑制氧自由基的損傷；抑制心肌細(xì)胞線粒體中鈣超載；下調(diào)促炎因子白

3、介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。那么，芪丹通脈片在抑制炎性因子釋放的同時(shí)，是否會(huì)上調(diào)炎癥抑制因子的釋放以發(fā)揮防治心肌缺血/再灌注損傷的作用尚不清楚。
　　研究目的：
　　1、觀察芪丹通脈片對(duì)缺血/再灌注損傷所致大鼠心電圖、心肌梗死面積、心肌病理形態(tài)學(xué)和心肌超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　2、研究炎癥抑制因子白細(xì)胞介素-10(IL-10)是否參與芪丹通脈片對(duì)心肌缺血/再灌注損傷的防治。
　　實(shí)驗(yàn)方法：<

4、br>　　1、動(dòng)物分組：SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(陰性對(duì)照)、模型組、恬爾心組(5mg/kg·d，陽(yáng)性對(duì)照)及芪丹通脈片高、中、低劑量組(芪丹通脈片浸膏干粉劑量分別為3.24、1.08和0.36g/kg·d，藥物用蒸餾水配制成等體積混懸液)，除假手術(shù)組6只外，其余每組11只。每只大鼠按照10ml/kg·d灌胃，假手術(shù)組和模型組灌以等量蒸餾水，連續(xù)灌胃7d后制備心肌缺血/再灌注模型。
　　2、制備SD大鼠心肌缺血/再灌注(I30mi

5、n,R2h)模型：大鼠經(jīng)腹腔注射3％戊巴比妥鈉(45mg/kg)麻醉后，固定，暴露氣管、插管，分離右頸總動(dòng)脈、插管，給予正壓人工呼吸。打開(kāi)胸腔，分離胸腺，暴露心臟，剪開(kāi)心包，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，缺血30min后，再灌注2h。
　　3、觀察指標(biāo)：冠脈結(jié)扎前、缺血即刻、缺血5、10、20和30min，再灌注即刻以及再灌注5、10和20min時(shí)間點(diǎn)的心率(heart rate,HR)；再灌注20min內(nèi)的心律失常發(fā)生情況；伊文氏藍(lán)-T

6、TC染色測(cè)定心肌梗死面積(infarct size,IS)與心肌缺血面積(area at risk,AAR)比值；HE染色觀察心肌病理形態(tài)；醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色觀察心肌超微結(jié)構(gòu)；再灌注2h經(jīng)右頸總動(dòng)脈取全血4ml，分離血清，ELISA法檢測(cè)血清IL-10含量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1、心率：冠狀動(dòng)脈結(jié)扎前，各組大鼠心率無(wú)差異(P均>0.05)。與模型組比較，芪丹通脈片高劑量組和恬爾心組均能顯著減慢缺血/再灌注過(guò)程中各時(shí)間點(diǎn)

7、的心率(P<0.05或P<0.01)，而芪丹通脈片中劑量組僅于缺血30min時(shí)心率顯著減慢，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；芪丹通脈片低劑量組在各時(shí)間點(diǎn)雖能減慢心率，但與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。
　　2、心律失常：在觀察期間，模型組大鼠頻發(fā)出現(xiàn)室性早搏(PVC)、室性心動(dòng)過(guò)速(VT)和室顫(VF)等心律失常，且心律失常首發(fā)時(shí)間多出現(xiàn)在再灌注即刻至5min之間，VT、VF的發(fā)生率分別是87.5％和

8、62.5％，且VT、VF的持續(xù)時(shí)間分別為31.67s和153.85s。在此期間，芪丹通脈片高劑量組大鼠雖也出現(xiàn)PVC、VT和VF等心律失常，但與模型組相比，心律失常首發(fā)時(shí)間延遲，VT、VF持續(xù)時(shí)間縮短(P<0.05或P<0.01)且發(fā)生率亦有所下降，心律失常類(lèi)型以偶發(fā)性PVC和VT多見(jiàn)。恬爾心組亦能縮短VT、VF持續(xù)時(shí)間(P均<0.01)，同時(shí)也可減低VT、VF的發(fā)生率(P均<0.05)，與模型組相比，其心律失常評(píng)分明顯降低(P<0.0

9、1)。
　　3、心肌梗死面積：給予心肌缺血30min，再灌注2h后，模型組大鼠缺血心肌出現(xiàn)明顯的心肌梗死現(xiàn)象；與模型組大鼠心肌梗死面積相比較，芪丹通脈片高劑量組和恬爾心組大鼠心肌梗死面積明顯縮小(P<0.05或P<0.01)。
　　4、心肌病理改變：正常心肌細(xì)胞排列整齊，肌纖維清晰，胞膜完整，無(wú)變性壞死；缺血/再灌注損傷后心肌細(xì)胞排列紊亂，心肌纖維橫紋不清或消失，有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；與模型組相比，芪丹通脈片高劑量組心肌細(xì)胞排列

10、較整齊，水腫減輕，心肌纖維橫紋較清晰，無(wú)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　5、心肌超微結(jié)構(gòu)改變：模型組心肌細(xì)胞壞死，局灶性肌絲液化；線粒體腫脹，局部膜破裂，基質(zhì)密度降低，呈空泡狀，嵴斷裂；細(xì)胞核腫脹，異染色質(zhì)增多，細(xì)胞膜下可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)水腫明顯。芪丹通脈片高劑量組及恬爾心組心肌超微結(jié)構(gòu)破壞明顯減輕，心肌細(xì)胞完整，排列整齊，Z線清晰可見(jiàn)；線粒體輕度腫脹，包膜完整，形態(tài)規(guī)則，少有嵴降解；細(xì)胞核膜完整，染色質(zhì)較均勻。
　　6、缺血

11、/再灌注后血清IL-10含量：造模后各組血清IL-10水平均較假手術(shù)組顯著升高(P均<0.01)；芪丹通脈片三個(gè)劑量組和恬爾心組的升高水平較模型組更明顯，其中以芪丹通脈片高劑量組和恬爾心組作用尤為顯著(P<0.05或P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、芪丹通脈片對(duì)缺血/再灌注損傷大鼠心肌具有明顯的保護(hù)作用。
　　2、芪丹通脈片能夠促進(jìn)內(nèi)源性IL-10大量釋放，抑制炎癥反應(yīng)。這可能是該藥發(fā)揮心肌保護(hù)作用的機(jī)制之一。