不同溫度處理對(duì)溫敏核不育水稻廣占63S育性表達(dá)及其蛋白質(zhì)組的影響.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以溫敏核不育水稻廣占63s為實(shí)驗(yàn)材料，研究了在水稻育性敏感期對(duì)其進(jìn)行低溫(22℃)處理后水稻育性的變化，并與高溫(>26℃)對(duì)照下的水稻育性進(jìn)行對(duì)比，將育性差異較大的一組水稻幼穗蛋白采用雙向電泳技術(shù)進(jìn)行分離，找出差異蛋白，并將這些差異蛋白進(jìn)行MALDI-TOF-MS鑒定和功能預(yù)測(cè)。主要結(jié)果如下： 1、與高溫對(duì)照組相比，在水稻育性轉(zhuǎn)換敏感期(即雌雄蕊形成期至花粉母細(xì)胞形成期)進(jìn)行低溫處理，其水稻育性顯著提高。高溫處理組(即大

2、于26℃高溫處理)水稻的育性僅為1％，而同時(shí)低溫處理(22℃)的水稻育性高達(dá)25.7％。 2、建立和優(yōu)化了一套適合實(shí)驗(yàn)室條件下幼穗全蛋白分離、鑒定的雙向電泳方法。采用IPG膠條進(jìn)行第一向電泳，上樣量為200μg，水化時(shí)間為12hr，然后500V電泳1hr，再1hr梯度上升到1000V，后3hr梯度上升到8000V，8000V穩(wěn)定2.5hr即20000Vhr，共約34700Vhr。第二向電泳為連續(xù)的SDS—PAGE，凝膠濃度為12

3、.5％。通過(guò)銀染顯色，獲得了分辨率和重復(fù)性較好的雙向電泳圖譜。 3、本研究對(duì)育性差異較大的兩組水稻幼穗蛋白采用雙向電泳技術(shù)進(jìn)行分離，結(jié)合PDQuest7.4 2D膠分析，在24×18 cm大小的膠上可檢測(cè)到約800個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。高溫處理膠和低溫處理膠相比，檢測(cè)到差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)共為147個(gè)，將差異點(diǎn)蛋白經(jīng)過(guò)酶解和基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(matrix assisted laserdesormion/ionization

4、 time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)進(jìn)行了肽質(zhì)指紋圖分析，通過(guò)采用Mascot軟件對(duì)MSDB數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行查詢和分析，其中14個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)得到了鑒定。鑒定的差異蛋白質(zhì)中，第Ⅴ期可育水稻中表達(dá)量上調(diào)的蛋白有：烯醇酶(2-磷酸甘油酸鹽(或酯)脫水酶)，磷酸丙糖異構(gòu)酶，線粒體F1-ATP酶；第Ⅴ期可育水稻特異表達(dá)的蛋白為小麥中組蛋白H<,2>B同源蛋白。第Ⅵ期可育水稻中表達(dá)量上調(diào)的蛋白有：咖