菜粉蝶提取物誘導黃瓜對炭疽病的抗性及其機理研究.pdf

1、本試驗測定了37種植物和4種昆蟲的80％乙醇提取物誘導黃瓜對炭疽病的抗病效果，在此基礎上構建了菜粉蝶提取物誘導黃瓜抗炭疽病的技術體系，探討了菜粉蝶提取物誘導黃瓜抗炭疽病的生理生化機制，并利用DDRT-PCR技術對經(jīng)菜粉蝶提取物誘導處理后接種炭疽病菌黃瓜葉片的基因表達進行了分析，對可能與誘導黃瓜抗炭疽病相關的差異表達基因片段進行回收、克隆和測序，為最終克隆這些基因、研究其功能奠定基礎。主要結果如下： 1．發(fā)現(xiàn)了菜粉蝶提取物可誘導黃

2、瓜對黃瓜炭疽病產(chǎn)生局部抗性和系統(tǒng)抗性。 2．建立了適合菜粉蝶提取物免疫誘導黃瓜抗炭疽病的技術體系。 ①最佳誘導方法為葉面噴霧法。 ②菜粉蝶提取物的最佳有效處理濃度為5.0 mg/mL。 ③誘導抗性表達的最佳誘導間隔期為3 d。 ④有效誘導次數(shù)為1次。 ⑤最佳誘導處理時期為黃瓜幼苗二葉一心期。 3．黃瓜葉片經(jīng)菜粉蝶提取物誘導后各種防御酶活性較空白對照均有所升高，過氧化物酶活性于誘導后

3、第5天達高峰值38.9(△OD/g·min)，多酚氧化酶活性于誘導后第4天達高峰值28.3(0.001 △OD/g·s)，苯丙氨酸解氨酶活性于誘導后第3天達高峰值56.4(0.01△OD/g·min)，超氧化物歧化酶活性于誘導后第2天達高峰值50.3(抑制率/g)。 4．菜粉蝶提取物誘導處理對黃瓜葉片的脯氨酸、丙二醛含量變化沒有明顯影響。 5．菜粉蝶提取物誘導處理可直接誘導黃瓜處理葉片或系統(tǒng)葉片積累病程相關蛋白(PRs，

4、)，如再用炭疽病菌挑戰(zhàn)接種，PRs在黃瓜植株中的積累會更加明顯。 6．用3個錨定引物、26個隨機引物的引物組合對經(jīng)菜粉蝶提取物誘導處理后接種炭疽病菌和只接種炭疽病菌的黃瓜葉片進行DDRT-PCR擴增，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染檢測，共獲得67條差異表達基因片段，對其進行回收，回收成功率為89.6％。挑選其中5個差異片段進行克隆、測序，并進行同源性分析，結果表明D1片段序列(344bp)與來自葉綠體psbB基因編碼的47kD蛋白結