腦出血模型中鐵離子潴留對遲發(fā)性腦損傷的作用機(jī)制研究.pdf

1、腦出血后血紅蛋白降解釋放的鐵離子在急性期過后仍長期滯留于腦內(nèi)。本研究擬觀察腦出血后潴留于腦內(nèi)的鐵離子是否對腦組織產(chǎn)生遲發(fā)性損傷，并對其機(jī)制進(jìn)行探索。
　　 研究方法：
　　 本研究分兩部分。第一部分：通過大鼠自體血基底節(jié)模型和大鼠海馬氯化亞鐵注射模型，觀察是否存在遲發(fā)性腦萎縮并進(jìn)行FJC染色檢測建模后2周時是否仍存在神經(jīng)元變性。同時，在不同時間點(diǎn)應(yīng)用Perl's染色觀察鐵離子腦內(nèi)潴留情況，應(yīng)用OX-6染色觀察小膠質(zhì)細(xì)胞激

2、活情況，運(yùn)用磷酸化P65染色觀察NF-kB活化情況，運(yùn)用鐵蛋白/OX-42復(fù)染觀察腦出血后鐵蛋白在小膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)情況。并觀察鐵離子螯合和米諾環(huán)素治療對遲發(fā)性腦萎縮和神經(jīng)功能的影響。第二部分：進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元培養(yǎng)。通過OX-6染色和磷酸化P65染色分別觀察Fe2+對小膠質(zhì)細(xì)胞的激活作用和對小膠質(zhì)細(xì)胞NF-kB活化的影響。通過Fe2+直接處理神經(jīng)元和Fe2+處理小膠質(zhì)細(xì)胞后所得上清再處理神經(jīng)元觀察Fe2+對神經(jīng)元的作用途徑，明確小

3、膠質(zhì)細(xì)胞在其中的作用，并給予米諾環(huán)素進(jìn)行干預(yù)治療。
　　 結(jié)果：
　　 大鼠腦出血模型中12周仍存在鐵離子潴留和出血側(cè)鐵蛋白染色增強(qiáng)，復(fù)染提示腦出血后4周后鐵蛋白輕/重鏈主要表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞。腦出血后2周時，出血側(cè)基底節(jié)未見明顯萎縮，在4周時萎縮出現(xiàn)，到8周時則更顯著。FJC染色提示2周時，血腫側(cè)仍有變性神經(jīng)元存在。在海馬FeC12注射模型中也能在2周時檢測到變性神經(jīng)元。鐵離子螯合治療可以有效減輕腦出血后的遲發(fā)性腦萎縮。

4、小膠質(zhì)細(xì)胞激活和NF-kB的活化現(xiàn)象在腦出血模型和海馬FeC12模型中都存在并至少持續(xù)至建模后2周。米諾環(huán)素可以減輕腦出血后的遲發(fā)性腦萎縮。Fe2+能直接激活培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞。Fe2+直接作用于培養(yǎng)神經(jīng)元，不能引起其LDH水平的增高，而Fe2+處理后的小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)一步孵育產(chǎn)生的上清對神經(jīng)元具有損傷作用，應(yīng)用米諾環(huán)素則能有效逆轉(zhuǎn)這種損傷，米諾環(huán)素還能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活和NF-kB的活化。
　　 結(jié)論：
　　 1)大鼠腦出血模