鐵皮石斛種質(zhì)資源評價創(chuàng)新及栽培技術(shù)研究.pdf

1、本研究采用HPLC建立安徽大別山、安徽霍山、云南紅河、云南玉溪、云南思茅、云南文山、云南石屏、福建寧化、江蘇南京、浙江天臺、浙江仙居、浙江鄞縣、廣西天峨12種不同產(chǎn)地鐵皮石斛特征指紋圖譜，并測定其石斛多糖、氨基酸、微量元素、重金屬含量后進(jìn)行不同產(chǎn)地鐵皮石斛種質(zhì)資源評價;同時進(jìn)行鐵皮石斛四倍體誘導(dǎo)鑒定及栽培技術(shù)創(chuàng)新研究，以便為優(yōu)質(zhì)鐵皮石斛藥材生產(chǎn)及管理提供理論、實(shí)踐依據(jù)。具體內(nèi)容及研究成果如下:
　　1.對12種不同產(chǎn)地鐵皮石斛進(jìn)行

2、種質(zhì)資源評價，結(jié)果顯示:12種不同產(chǎn)地鐵皮石斛指紋圖譜共有23個特征峰;經(jīng)聚類分析后將12種不同產(chǎn)地鐵皮石斛共分為四類;產(chǎn)于云南玉溪、福建寧化、江蘇南京、浙江天臺鐵皮石斛莖段中銅、砷、鎘含量分別超標(biāo)26.25％、44.5％、27.33％、122.3％，其它產(chǎn)地銅、鉛、汞、砷、鎘五種重金屬含量差異不大;來源于云南紅河、云南文山、浙江天臺的鐵皮石斛所含的石斛多糖平均含量最高分別為:32.09％、32.86％、36.03％;浙江天臺人體必需氨

3、基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高達(dá)16.90 mg·g-1。
　　2.鐵皮石斛種質(zhì)創(chuàng)新，經(jīng)不同質(zhì)量濃度的秋水仙素(C22H25O6)和0.02 g·mL-1二甲基亞砜(DMSO)混合水溶液處理后進(jìn)行組織培養(yǎng)，通過對變異株進(jìn)行形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)及流式細(xì)胞儀鑒定，獲得穩(wěn)定的四倍體植株，其DNA相對含量為400，而二倍體僅為200;四倍體植株葉片中葉綠素含量、可溶性蛋白、可溶性糖含量均高于二倍體，分別為5.03 mg·g-1、3.59mg·g-1、2.98

4、 mg·g-1;葉片抗氧化酶(POD、SOD)活性均顯著高于二倍體，分別為9.08 U·g-1·min-1、180.4 U·g-1，且四倍體植株MDA含量累積明顯降低。
　　3.通過一步成苗、無激素培養(yǎng)對鐵皮石斛組織培養(yǎng)生產(chǎn)優(yōu)化:(1)一步成苗:鐵皮石斛從種子萌發(fā)開始，不經(jīng)過原球莖增殖分化和莖段增殖直接成苗;(2)一步成苗最適萌發(fā)培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+KT1.0 mg·L-

5、1+土豆泥150～200 g·L-1，壯苗生根最適培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.3 mg·L-1+土豆泥150～200 g·L-1+香蕉泥150～200 g·L-1;(3)鐵皮石斛的一種無激素組織培養(yǎng)方法，包括從鐵皮石斛種子萌發(fā)培養(yǎng)基培養(yǎng)、圓球莖的培養(yǎng)、莖段增殖分化和生根壯苗四個不同的生長發(fā)育階段;(4)鐵皮石斛無激素培養(yǎng)過程中由天然添加物（土豆、香蕉）代替激素。
　　4.蘑菇渣復(fù)合基質(zhì)對鐵皮石斛生

6、長及有效成分的影響，在相同的栽培管理?xiàng)l件下，移栽30 d后，組培苗在處理GC、GD中成活率達(dá)97.3％、95.8％顯著高于其他處理和對照，其中處理GC的株高、莖粗、根長和新根數(shù)也顯著高于其他處理;移栽365 d后，處理GC的成活率、株高、莖粗、根長和新根數(shù)依然最高，分別達(dá)到94.6％、7.87 cm、0.307 cm、5.57 cm、7.67個與其他處理差異顯著，同時石斛多糖和總生物堿含量在處理GC中也達(dá)到最大，分別為8.88％和0.3

7、0％并與其他處理及對照差異顯著。
　　5.鐵皮石斛耐熱性研究表明:噴施不同濃度水楊酸后，鐵皮石斛幼苗在高溫脅迫下的耐熱性表現(xiàn)為:在高溫脅迫環(huán)境下，隨著脅迫時間的延長，不同濃度水楊酸處理均能有效地緩解高溫對鐵皮石斛植株傷害;1.5～2.0 mmol·L-1水楊酸處理使鐵皮石斛葉片中SOD、POD活性顯著提高，0.5～1.5 mmol·L-1水楊酸處理葉片中CAT、APX活性顯著提高;1.5～2.0 mmol·L-1水楊酸處理可顯著促