白菜黃萎病抗性分子鑒定技術(shù)的研究.pdf

1、大白菜（Brassica rapaL.ssp.pekinensis）原產(chǎn)于中國(guó)，是我國(guó)栽培面積最大的蔬菜種類(lèi)，目前已逐漸成為世界性蔬菜作物。據(jù)農(nóng)業(yè)部統(tǒng)計(jì)，每年我國(guó)大白菜種植面積約267萬(wàn)公頃，占全國(guó)蔬菜總播種面積的15％左右，可見(jiàn)大白菜對(duì)我國(guó)蔬菜供應(yīng)和農(nóng)民增收具有重要作用。近年來(lái)，大白菜黃萎病相繼在北京、河北張家口、甘肅永登、云南通海等大白菜育種基地及規(guī)?；N植基地爆發(fā)，并迅速向周邊地區(qū)擴(kuò)散，大白菜黃萎病已成為這些地區(qū)最為嚴(yán)重的病害之一

2、?？共∑贩N的種植對(duì)大白菜安全生產(chǎn)具有重要意義。因此，黃萎病抗病品種的選育現(xiàn)已成為大白菜育種的主要目標(biāo)之一。
　　前期研究的結(jié)果已初步確定大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）是引起大白菜黃萎病的病原菌，為進(jìn)一步明確病原菌類(lèi)型，本研究利用18S rDNAⅠ型內(nèi)含子、線粒體SSU rDNA和細(xì)胞色素b基因序列對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的3個(gè)病原菌分離物進(jìn)行了分子鑒定;并以4個(gè)對(duì)黃萎病具有明顯抗性差異的大白菜自交系為材料，研究了接種黃

3、萎病菌后植株病癥、葉面積和葉綠素含量等的變化;采用熒光定量PCR技術(shù)，通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)體系，建立了大白菜黃萎病抗性的分子診斷技術(shù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保存的BCHW10-2、BCHW8-35和BCHWJ-15三個(gè)黃萎病株分離物的18S rDNAⅠ型內(nèi)含子、線粒體SSU rDNA和色素b基因序列進(jìn)行分析，進(jìn)一步確認(rèn)這3個(gè)病原菌分離物屬于大麗輪枝菌，長(zhǎng)孢類(lèi)型（Verticillium dahliae var.longis

4、porum）。
　　2.對(duì)黃萎病具有明顯抗性差異的4個(gè)自交系接種病原菌后，進(jìn)行病害癥狀觀察，對(duì)葉片鮮重、葉綠素和類(lèi)胡蘿卜含量等生理指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)感病植株出現(xiàn)明顯的矮化和葉片黃化現(xiàn)象;與清水處理的對(duì)照植株相比，抗病和易感病品種的葉面積、葉片鮮重、葉綠素含量等都出現(xiàn)不同程度的下降，但感病品種下降的幅度明顯大于抗病品種;利用堿性品紅對(duì)接種后的葉片染色觀察發(fā)現(xiàn)，抗病品種中，品紅能夠沿維管束對(duì)整個(gè)葉片進(jìn)行染色;而對(duì)感病品種，品紅不能沿維

5、管束布滿整個(gè)葉片，因此推測(cè)接種后感病品種維管束遭破壞程度比抗病品種嚴(yán)重。
　　3.利用病原菌的rDNA-ITS序列，設(shè)計(jì)合成了能對(duì)植株器官中的病原菌進(jìn)行特異性擴(kuò)增的引物HW1;通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)體系，利用qRT-PCR對(duì)黃萎病具有明顯抗性差異的4個(gè)自交系接種后不同時(shí)期、不同器官中黃萎病菌進(jìn)行定量研究。結(jié)果顯示植株根、莖、葉中病原菌含量與自交系的抗病性呈負(fù)相關(guān)。從而建立了大白菜黃萎病抗性的定性、定量分子診斷技術(shù)，為黃萎病抗病育種奠定了基礎(chǔ)