江蘇省不同地區(qū)淡色庫(kù)蚊的遺傳多樣性分析.pdf

1、[目的]應(yīng)用擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP)技術(shù)對(duì)江蘇省不同地區(qū)淡色庫(kù)蚊的遺傳多樣性及遺傳變異進(jìn)行分析，計(jì)算樣品間的遺傳相似性指數(shù)和遺傳距離，并構(gòu)建UPGMA（非加權(quán)分組平均法）系統(tǒng)發(fā)生樹。
　　[方法]從江蘇省收集了8個(gè)地區(qū)的淡色庫(kù)蚊，分別來自常熟、張家港、鹽城、無錫、徐州、南京、南通、昆山，還收集了南京醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的典型淡色庫(kù)蚊;用QI

2、AGEN DNeasy Kit試劑盒分別提取蚊基因組DNA，通過COI基因擴(kuò)增、多重PCR擴(kuò)增ITS基因和ITS的克隆測(cè)序進(jìn)行模板的驗(yàn)證，然后進(jìn)行AFLP的分析，即通過酶切與連接、預(yù)擴(kuò)增、選擇性擴(kuò)增，再經(jīng)毛細(xì)管電泳篩選出分辨率高的電泳圖;將電泳圖上出現(xiàn)的條帶標(biāo)記為1，沒有條帶的標(biāo)記為0，建立0，1矩陣，將結(jié)果輸入NTSYS2.10軟件上計(jì)算Nei-Li相似性系數(shù)，遺傳距離(GD)用公式計(jì)算:GD=1-2Nab/(Na+Nb)，采用UPG

3、MA(unweighted pair-groupmethod with arithmetic means，非加權(quán)分組平均法)進(jìn)行聚類分析。
　　[結(jié)果]從80對(duì)引物組合中篩選出10對(duì)引物組合，這10對(duì)引物組合在9個(gè)樣本中共擴(kuò)增到262個(gè)位點(diǎn)，大小位于100-1500bp，多態(tài)性位點(diǎn)185個(gè)，多態(tài)性比率(PP)達(dá)70.6％，每對(duì)引物擴(kuò)增到的多態(tài)性位點(diǎn)在14-30個(gè)之間，平均18.5個(gè)。引物組合E2M7擴(kuò)增的多態(tài)性最高，多態(tài)性比例為8

4、7.5％，引物組合E4M7擴(kuò)增的多態(tài)性最低，多態(tài)性比例為48.3％，10對(duì)引物中昆山地區(qū)擴(kuò)增的位點(diǎn)最多（176個(gè)），南通地區(qū)擴(kuò)增的位點(diǎn)最少（48個(gè)）;利用NTSYS2.10軟件計(jì)算表明，昆山與張家港間的遺傳相似性指數(shù)最大(0.8478)，遺傳距離最小(0.1522)，無錫和徐州間的遺傳相似性指數(shù)最小(0.2139)，遺傳距離最大(0.7861)。基于Nei遺傳距離構(gòu)建的UPGMA系統(tǒng)發(fā)生樹表明，以相似性系數(shù)0.64為域值，9個(gè)地區(qū)的淡色